奧浦邁無血清雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)基HybriSFM-P1B

HybriSFM-P1B 是無血清、含低濃度蛋白、專門針對高密度雜交瘤細(xì)胞生長開發(fā)的培養(yǎng)基，適用于不同雜交 瘤細(xì)胞高密度懸浮培養(yǎng)和蛋白抗體表達(dá)。

應(yīng)用范圍:HybriSFM-P1B 適用于科研和基于細(xì)胞培養(yǎng)的大規(guī)模生物制品的生產(chǎn)，但不可直接用于人體或作為藥物使用。

儲存：2~8℃冷藏，干燥避光保存 

運(yùn)輸：常溫（液體）、冷藏（干粉）

液體培養(yǎng)基配制方法：

1.取最終配制體積 90%的超純水，水溫 25~35℃（注：一次性配制體積不低于 1L）； 

2.稱量 16.61 g/L 干粉培養(yǎng)基，緩慢加入水中并攪拌； 

3.稱量 2.45 g/L 碳酸(空格)氫鈉，加入水中并持續(xù)攪拌；

4.攪拌 20 分鐘；加入 5N NaOH 調(diào)節(jié) pH 直至完(空格)全溶解；加 5N HCl 將 pH 調(diào)回至 7.0；

5.加超純水校正到最終配積；用 NaCl 調(diào)節(jié)滲透壓到 320±10 mOsm/kg； 

6.繼續(xù)攪拌 10 分鐘，無菌過濾到合適容器。

干粉及液體培養(yǎng)基質(zhì)量指標(biāo)

產(chǎn)品指標(biāo)                  HybriSFM-P1B Medium     HybriSFM-P1B DPM 

pH 值                       7.0~7.5                          7.0~7.5 

滲透壓(mOsm/kg)     300~340                         300~340 

溶解性                      ——                               按配制規(guī)程操作溶解良好 

內(nèi)毒素(EU/mL)         ＜1.0                              ＜1.0 

無菌檢查                  應(yīng)無菌生長                      ——

培養(yǎng)條件 ：37°C，5-10%CO2 

搖床設(shè)置：轉(zhuǎn)速 125-135 rpm

奧浦邁無血清雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)基HybriSFM-P1B

使用方法 

1. 直接轉(zhuǎn)換 

如果當(dāng)前雜交瘤細(xì)胞已經(jīng)是懸浮培養(yǎng)于無血清培養(yǎng)基中，大部分情況下，可以直接適應(yīng)奧浦邁培養(yǎng)基，只需按照 日常傳代方式（稀釋）更換培養(yǎng)基即可。

2. 去血清馴化 

如果細(xì)胞目前培養(yǎng)于添加血清的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，則需要進(jìn)行減血清馴化，下面為細(xì)胞馴化要點(diǎn)：

 1) 選用低代次，對數(shù)期細(xì)胞開始馴化； 

 2) 減血清可按照 10%、5%、2.5%、1%、0%的順序進(jìn)行，在每個血清含量進(jìn)行細(xì)胞傳代，直至細(xì)胞生長正 常，再進(jìn)入下一個血清濃度。

3. 細(xì)胞傳代 

當(dāng)雜交瘤細(xì)胞密度達(dá)到(2~3)x106 cells/ml 時，將細(xì)胞以(0.2~0.3)x106 cells/ml 接種于新的培養(yǎng)基中，繼續(xù)培養(yǎng)。 接種時無需離心，直接稀釋即可。

4. 流加批次培養(yǎng)生產(chǎn)抗體 

對于基礎(chǔ)培養(yǎng)基及其搭配補(bǔ)料，流加批次培養(yǎng)評價時沒有固定的最佳補(bǔ)料方案，針對每個細(xì)胞和產(chǎn)品都應(yīng)該利用 DOE 方式進(jìn)行流加批次培養(yǎng)工藝的建立和優(yōu)化。推薦的使用方案如下（流加批次培養(yǎng)最高細(xì)胞密度可以達(dá)到 10 x106 cells/ml，抗體產(chǎn)量超過 2.5 g/L）：

1) 用于流加培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的種子細(xì)胞密度約為 3 x 106 cells/ml，按(0.3~0.6)x106 cells/ml 密度接種； 

2) 建議每天取樣檢測細(xì)胞密度并進(jìn)行生化分析。接種后第二天或第三天可以開始補(bǔ)料，之后按上表中提供的 策略，進(jìn)行每天或隔天補(bǔ)料； 

3) 當(dāng)糖溶度低于 3 g/L 的時候需要額外補(bǔ)加葡萄糖濃縮液至 6 g/L 終濃度。