核酸外切酶IV惠誠生物Exonuclease IV

核酸外切酶 IV Exonuclease IV來源于大腸桿菌，屬于IV型外切酶家族。Exonuclease IV是一個環(huán)狀的四聚體，每個單體包含約290個氨基酸。核酸外切酶 IV Exonuclease IV是一種雙鏈特異性的外切酶，可從DNA的3'端切除核苷酸，產(chǎn)生3'突出的單鏈區(qū)域和5'磷酸化的DNA斷端。Exonuclease IV是研究DNA二級結(jié)構(gòu)與拓撲結(jié)構(gòu)的重要工具，并在DNA修補和重組等過程中發(fā)揮重要作用。Exonuclease IV是一種具有與Exonuclease III不同作用方向的外切酶。在RPA反應(yīng)中聯(lián)合使用Exonuclease III和Exonuclease IV，可以產(chǎn)生協(xié)同作用，全面優(yōu)化RPA產(chǎn)物，實現(xiàn)更快速、更靈敏和更專一的擴增。 

核酸外切酶IV惠誠生物Exonuclease IV

規(guī)格參數(shù)：

貨號：EH04801 

規(guī)格：5000U/25000U     

為工業(yè)客戶提供n*25000U。

質(zhì)量控制:

純      度: 經(jīng)高效液相色譜（SEC-HPLC）和SDS-PAGE檢測，純度大于95%.

使用說明：

長期儲存于-80℃，使用后保存于-20℃,避免反復(fù)凍融。

核酸外切酶 IV Exonuclease IV催化機制如下:

a. 與DNA雙鏈區(qū)結(jié)合，內(nèi)切位點識別切割位點; 

b. 外切位點將3'端的核苷酸和磷酸基團從DNA磷酸主鏈上切除; 

c. Exonuclease IV沿著DNA鏈移向5'端，重復(fù)步驟b，依序切除核苷酸;

d. 當(dāng)遇到DNA單鏈區(qū)時，酶失去活性,終止切割。

核酸外切酶 IV Exonuclease IV產(chǎn)品特點：

1. 它包含內(nèi)切位點和外切位點:

內(nèi)切位點：與DNA雙鏈區(qū)結(jié)合,定位切割位點; 

外切位點：負責(zé)從DNA磷酸主鏈上切除3'端的核苷酸和磷酸基團。

2. 雙鏈特異性

Exonuclease IV只可作用于DNA雙鏈區(qū)，單鏈DNA區(qū)域不具有活性。這使其適用于研究DNA的二級結(jié)構(gòu)。

3. 依賴性

Exonuclease IV的活性依賴Mg2+，并受到溶液的pH值影響，最適作用pH為8.5。高濃度的NaCl可抑制其活性。

4. 切割效率

在最適條件下，Exonuclease IV的切割速度為每秒60-100個磷酸基團，切割效率較高。

5. 5'磷酸化

Exonuclease IV切割產(chǎn)生3'突出的單鏈DNA和5'磷酸化的DNA斷端。這為其在DNA修補和重組中的應(yīng)用提供了基礎(chǔ)。

核酸外切酶 IV Exonuclease IV Exonuclease IV主要應(yīng)用包括：

1. DNA末端加工

Exonuclease IV可產(chǎn)生3'突出的單鏈DNA和5'磷酸化DNA端，這些DNA末端可用于連接、寡核苷酸鏈接及DNA修補等實驗。

2. DNA修補研究

Exonuclease IV切割產(chǎn)生的DNA末端可作為DNA修補反應(yīng)的底物，用于研究DNA修補機理及相關(guān)酶的作用機制。 

3. 重組研究

Exonuclease IV切割產(chǎn)生的DNA末端可用于重組研究，如用于質(zhì)粒的構(gòu)建與驗證。

4. DNA二級結(jié)構(gòu)分析

比較Exonuclease IV在雙鏈DNA和單鏈DNA上的切割活性，可以判斷DNA區(qū)域的二級結(jié)構(gòu)，研究DNA的解旋和復(fù)性。

5. DNA拓撲結(jié)構(gòu)分析

Exonuclease IV的切割活性受DNA的拓撲結(jié)構(gòu)影響，可用于研究DNA的超螺旋和球狀結(jié)構(gòu)等。

6. DNA蛋白質(zhì)相互作用

DNA結(jié)合蛋白可影響Exonuclease IV的切割活性,利用這一特點可以研究DNA與蛋白質(zhì)的相互作用機制。

7. 核苷酸切除測定

使用放射性標(biāo)記的DNA，通過測量Exonuclease IV切割后釋放的放射性核苷酸來定量研究影響其活性的因素。

8. DNA損傷檢測

DNA損傷會阻礙Exonuclease IV的活性，通過比較不同DNA區(qū)域Exonuclease IV的切割效率可以檢測DNA損傷的位置和程度。

9. 遺傳學(xué)研究

Exonuclease IV可用于切割整個基因組DNA，產(chǎn)生特定長度的DNA片段，通過電泳分離和 Southern blot 分析染色體DNA，用于遺傳學(xué)研究。

核酸外切酶 IV Exonuclease IV Exonuclease IV在RPA技術(shù)中作用:

1. 降低非特異性產(chǎn)物

與Exonuclease III相似，Exonuclease IV可以通過降解非特異性擴增產(chǎn)物的5'單鏈末端來減少其濃度，提高RPA產(chǎn)物的純度和專一性。

2. 提高檢出靈敏度

Exonuclease IV通過降解未結(jié)合引物的游離單鏈DNA來減少反應(yīng)底物，提高特異性擴增產(chǎn)物的相對濃度，增強RPA的檢出靈敏度。

3. 加快反應(yīng)速度

類似Exonuclease III，Exonuclease IV可以減少底物競爭，使更多的引物和DNA聚合酶結(jié)合到特異性擴增區(qū)域，加快RPA的反應(yīng)進程。

4. 改善產(chǎn)物分析

使用Exonuclease IV后可以得到更純凈的特異性RPA產(chǎn)物，便于電泳、測序等手段的檢測和分析。

5. 防止引物延伸

某些情況下，RPA的引物可能與非目標(biāo)區(qū)域發(fā)生非特異性結(jié)合并延伸。Exonuclease IV可以降解這些非特異延伸產(chǎn)物的5'末端，防止引物的過度延伸，提高RPA的專一性。

相關(guān)RPA原料：

EH04401 DNA重組酶 Recombinase A

EH03201 Bst DNA聚合酶 Bst DNA polymerase

EH04801 核酸外切酶 IV Exonuclease IV

EH04701 核酸外切酶 III Exonuclease III

EH02501 M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶 M-MuLV Reverse Transcriptase

EH03301 Bsu DNA聚合酶大片段 Bsu DNA polymerase, Large Fragment

EH04501 重組肌酸激酶(CK) Creatine Kinase

EH03501 T4 UvsX重組酶 T4 UvsX Recombinase

EH03401 T4噬菌體基因32編碼蛋白(gp 32) T4 gene 32 Protein

EH03601 T4 UvsY蛋白 T4 UvsY Protein

HM0058 重組鼠源RNase抑制劑(40 U/µL) RNase Inhibitor