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目錄:上海牧榮生物科技有限公司>>實驗試劑>>試劑盒>> 葡萄糖氧化酶(GOD)測試盒

葡萄糖氧化酶(GOD)測試盒
  • 葡萄糖氧化酶(GOD)測試盒
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更新時間:2024-05-08 12:11:50瀏覽次數(shù):412評價

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葡萄糖氧化酶(GOD)測試盒 葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)試劑盒 上海牧榮生物科技有限公司專業(yè)實驗室產(chǎn)品.為客戶全面解決實驗、生產(chǎn)、開發(fā)需求,提供方便、快捷的服務。

葡萄糖氧化酶(GOD)測試盒

微量法 100管/48樣

正式測定前取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義

GOD(EC 1.1.3.4)廣泛存在于動物、和植物中,催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸,并產(chǎn)生H2O2,是生物體中產(chǎn)生活性氧的代謝途徑之一。

測定原理

GOD催化產(chǎn)生H2O2,過氧化物酶催化H2O2氧化4-氨基安替比林偶聯(lián)酚,生成有色化合物,在500 nm有特征吸收峰,顏色深淺與GOD活性成線性關系。

試驗中所需的儀器和設備

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水

試劑的組成和配制

提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;

緩沖液:液體30mL×1瓶,4℃保存;

試劑一:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入10mL緩沖液充分溶解待用;用不完的試劑4℃保存一個月;

試劑二:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入10mL緩沖液充分溶解待用;用不完的試劑4℃保存一個月;

樣品測定的準備 

1、細菌、細胞或組織樣品的制備:

細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

2、血清(漿)樣品:直接檢測。

測定步驟

  1. 分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至500nm,蒸餾水調(diào)零。

  2. 試劑一和試劑二的配制:參見試劑的組成和配制。

3、煮沸樣本的準備:取200μL樣本至新的EP管中,95℃水浴10min,冷卻至室溫后,8000g 4℃離心10min,取上清作為對照管的煮沸樣本待測。

4、測定操作表

試劑(μL)

對照管

測定管

樣本


50

煮沸樣本

50


試劑一

75

75

試劑二

75

75

混勻,35'C保溫15min后,于500nm波長處讀取吸光度。ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管需設一個對照管。

GOD活力單位的計算

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

回歸方程為y = 2.8348x - 0.0169;x為H2O2標準品濃度(μmol/mL),y為ΔA。

1、血清(漿)GOD活力的計算

單位定義每mL血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2為一個酶活力單位。

GOD(nmol/min/mL)= (ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反總÷V樣÷T×1000=58.8×(ΔA+0.0169)

2、細菌、細胞或組織GOD活力的計算

(1)按蛋白濃度計算

單位定義每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2為一個酶活力單位。

GOD(nmol/min/mg prot)=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反總÷(V樣×Cpr) ×1000÷T

=58.8×(ΔA+0.0169)÷Cpr

(2)按樣本鮮重計算

單位定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2為一個酶活力單位。

GOD(nmol/min/g鮮重)=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反總÷(W×V樣÷V樣總) ×1000÷T

=58.8×(ΔA+0.0169)÷W

(3)按細菌或細胞密度計算

單位定義:每一萬個細菌或細胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2為一個酶活力單位。

GOD(nmol/min/104 cell)=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V反總÷(500×V樣÷V樣總) ×1000÷T

=0.118×(ΔA+0.0169)

V反總:反應體系總體積,0.125mL; V樣:加入樣本體積,0.05mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,15 min; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細菌或細胞總數(shù),500萬。

 b.用96孔板測定的計算公式如下

回歸方程為y = 1.4174x - 0.0169;x為H2O2標準品濃度(μmol/mL),y為ΔA。

1、血清(漿)GOD活力的計算

單位定義每mL血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2為一個酶活力單位。

GOD(nmol/min/mL)= (ΔA+0.0169) ÷1.4174×V反總÷V樣÷T×1000=118×(ΔA+0.0169)

2、細菌、細胞或組織GOD活力的計算

(1)按蛋白濃度計算

單位定義每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2為一個酶活力單位。

GOD(nmol/min/mg prot)=(ΔA+0.0169) ÷1.4174×V反總÷(V樣×Cpr) ×1000÷T

=118×(ΔA+0.0169)÷Cpr

(2)按樣本鮮重計算

單位定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2為一個酶活力單位。

GOD(nmol/min/g鮮重)=(ΔA+0.0169) ÷1.4174×V反總÷(W×V樣÷V樣總) ×1000÷T

=118×(ΔA+0.0169)÷W

(3)按細菌或細胞密度計算

單位定義:每一萬個細菌或細胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol H2O2為一個酶活力單位。

GOD(nmol/min/104 cell)=(ΔA+0.0169) ÷1.4174×V反總÷(500×V樣÷V樣總) ×1000÷T

=0.235×(ΔA+0.0169)

V反總:反應體系總體積,0.125mL; V樣:加入樣本體積,0.05mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,15 min; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細菌或細胞總數(shù),500萬。


上海牧榮生物科技有限公司

  1. 國內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理。

  2. 國外試劑的訂購。可提供歐美實驗室品牌的采購方案。

  3. 提供加急物流處理,進口貨物,最快交期1-2周。

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  5. 公司代理眾多有名生命科學領域的研究試劑、儀器和實驗室消耗品品牌:CELL DATA,Alamanda Polymers, cstti,Click Chemistry tools,Nanoprobes,Ancell,NANOCS,Ambeed, Inc,SPEED BioSystems, LLC,Tulip Biolabs, Inc,Torrey Pines Biolabs,magsphere ,FabGennix International ,paratechs,Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

  6. 質(zhì)量保證,所有產(chǎn)品都提供售后服務。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務模式,為客戶全面解決實驗、生產(chǎn)、開發(fā)需求。公司整合國際與國內(nèi)資源,加強網(wǎng)絡建設,提高公司內(nèi)部運作效率,為客戶提供方便、快捷的服務。

  7. 公司突出創(chuàng)新思維,提高工作效能,減低運作成本,為客戶提供優(yōu)惠的價格。

葡萄糖氧化酶(GOD)測試盒

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