iElisa 磺胺二甲基嘧啶檢測(cè)試劑盒

iElisa 磺胺二甲基嘧啶檢測(cè)試劑盒

1. 概要 本試劑盒是應(yīng)用 ELISA 技術(shù)研發(fā)的藥物殘留檢 測(cè)產(chǎn)品,與儀器分析技術(shù)比較，能經(jīng)濟(jì)、快速地檢測(cè) 出肌肉組織、蜂蜜、牛奶、血清等中的磺胺二甲基 嘧啶。 2. 原理 本試劑盒是利用競(jìng)爭(zhēng) ELISA 方法，在酶標(biāo)板微 孔上預(yù)包被抗磺胺二甲基嘧啶抗原。檢測(cè)時(shí)，加入 標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液，磺胺二甲基嘧啶抗體及酶標(biāo)記 物，包被抗原和加入樣本中的磺胺二甲基嘧啶競(jìng)爭(zhēng) 性地與磺胺二甲基嘧啶抗體結(jié)合后，再與酶標(biāo)記物 形成抗原抗體復(fù)合物，用 TMB 底物顯色；加入反 應(yīng)終止液，在 450nm 波長(zhǎng)酶標(biāo)儀下進(jìn)行檢測(cè)，樣品 中的磺胺二甲基嘧啶濃度與吸收光強(qiáng)度成反比。 與類(lèi)似物的交叉反應(yīng)率： 磺胺二甲基嘧啶（SM2）……………………………100% 磺胺間二甲氧嘧啶（SDM）…………………………10% 磺胺甲基嘧啶（SM1 ）………………………………12% 磺胺嘧啶 （ S D 或 S D Z ） …………………… … 4 % 磺胺甲噁唑（SMZ）……………………………………… 1% 3. 試劑盒組成 酶標(biāo)板 1 塊，96 孔/板 標(biāo)準(zhǔn)液 6 瓶（1ml/瓶）：0 ppb、1ppb、3ppb、9ppb、 27ppb、81ppb 抗體工作液 ………………………7ml 酶標(biāo)記物 …………………………7ml 底物液 A …………………………7ml 底物液 B …………………………7ml 終止液 …………………………7ml 20X 濃縮洗滌液 ………………40 ml 2X 濃縮復(fù)溶液 ………………50 ml 說(shuō)明書(shū) ……………………………1 份 4. 需要的儀器、試劑 （1）設(shè)備 ……微孔板酶標(biāo)儀(450nm) ……振蕩器、離心機(jī) ……微量移液器：20μl～200μl,100μl~1000μl ……容量瓶：100ml，500ml，1000ml （2）試劑 ……乙酸乙酯、正己烷、乙腈、Na2HPO4·12H2O、 NaOH 、濃 HCL 、NaH2PO4·2H2O 樣本前處理需配制： 配液 1：0.2M NaOH 溶液 0.8gNaOH 用去離子水 100ml 溶解 配液 2：0.02M PB 緩沖液 稱(chēng)取 2.58g Na2HPO4•12H2O 和 0.44g NaH2PO4• 2H2O 加去離子水 500ml 溶解。 配液 3：復(fù)溶工作液 2X 濃縮復(fù)溶液在使用前請(qǐng)按 1：1 稀釋 （1 份濃縮復(fù)溶液+1 份去離子水） 配液 4：洗滌液 將 40ml 濃縮洗滌液（20 倍濃縮）用去離子水稀釋 20×濃縮洗滌液在使用前請(qǐng)按 1：19 稀釋?zhuān)? 份濃 縮洗滌液+19 份去離子水）（可按需配置, 稀釋后的 洗滌液可在 4℃保存一個(gè)月） 5. 樣品處理 樣本處理前須知 處理任何樣本時(shí)，都須注意： （1）實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的 試劑時(shí)要更換吸頭。 （2）實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈，必 須使用潔凈實(shí)驗(yàn)器具，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 樣本處理步驟： （A）組 織（雞、鴨、豬肌肉/肝臟、雞蛋、魚(yú)、 蝦等） 1．稱(chēng)取 3±0.05g 勻漿物置 50ml 離心管中，先加入 3ml 0.02M PB 充分振蕩混勻，再加入 4ml 乙酸 乙酯和 2ml 乙腈，充分振蕩 5min，于室溫 4000 轉(zhuǎn)/ 分以上速度離心 10min； 2．移取 2ml 上層有機(jī)相（約相當(dāng)于 1g 的樣本）至 干凈玻璃試管中,在 56℃水浴下氮?dú)?空氣吹干； 3．加入 1ml 正己烷溶解干燥的殘留物，再加入 1ml 復(fù)溶工作液強(qiáng)烈振蕩混合 30s，室溫 4000 轉(zhuǎn)/分，離 心 5min。 4．去除上層有機(jī)相，取 50µl 下層用于分析。樣本稀釋倍數(shù)：1 （B） 血清樣本 1、將血樣本于室溫放置 30min，于 10℃，4000 轉(zhuǎn)/ 分以上離心 10min，分離出血清或過(guò)濾血清； 2、取 1ml 血清，加入 3ml 0.02 M PB 緩沖液混合， 混合 30s； 3、取 50µl 用于分析。 樣本稀釋倍數(shù)：4 （C）蜂蜜 1、 稱(chēng)取 1±0.05g 蜂蜜樣本于 50ml 離心管中，加 入 1ml 0.5M 鹽酸 置于 37℃環(huán)境中 30min； 2、加入 2.5ml 0.2 M 氫氧化鈉 (將 PH 值調(diào)至 5 左 右)再加入 4ml 乙酸乙脂振蕩 5min，4000 轉(zhuǎn)/分以上 室溫離心 10min； 3、取 2ml 上層有機(jī)相至干凈玻璃試管中，于 56℃ 水浴下氮?dú)?空氣吹干，加 0.5ml 復(fù)溶工作液復(fù)溶， 強(qiáng)烈振蕩混合 30s； 4、取 50µl 用于分析。 樣本稀釋倍數(shù)：1 （D）牛奶 1、 取 1ml 牛奶樣本用 0.02 M PB 緩沖液按 1︰19 （v/v）稀釋?zhuān)?20µl 牛奶+380µl 0.02 M PB 緩沖 液），混合 30s； 2、 取 50µl 用于分析。 樣本稀釋倍數(shù)：20 6． 酶聯(lián)免疫分析程序 測(cè)定前須知： 1、使用之前將所有試劑和需用微孔板回升至室溫。 2、使用之后立即將所有試劑放回 2-8℃。 3、在使用中不要讓微孔干燥。 4、在 ELISA 分析中的重復(fù)性，很大程度上取決于 洗板的*性，正確的洗板操作是 ELISA 測(cè)定程序 中的要點(diǎn)。 5、在所有恒溫孵育過(guò)程中，避免光線(xiàn)照射，用該 板膜蓋住微孔板。 測(cè)定步驟： 1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，在室溫下平衡 30 分鐘，每種液體使用前均須搖勻。注意標(biāo)準(zhǔn)液均 需做 2 個(gè)平行試驗(yàn)。 2、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本 50µl /孔到各自的微孔中，然后加 酶標(biāo)記物 50μ l/孔，再加入 50µl /孔的抗體工作液， 輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板，37℃避光反應(yīng) 30min 。 3、洗板：小心揭開(kāi)蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，加 洗滌液 250ml/孔，每次浸泡 15~30 秒，充分洗滌 4 －5 次，用吸水紙拍干。 4、顯色：每孔先各加入底物液 A 50μ l，再各加入 底物液 B 50μ l，輕輕晃蕩混勻，并在 37℃下避光 反應(yīng) 15 分鐘。 5、讀數(shù)：每孔各加 50μ l 終止液，在酶標(biāo)儀于 450nm 處測(cè)定 OD 值（建議用 450/630nm 雙波長(zhǎng)檢測(cè)，在 5 分鐘內(nèi)讀完數(shù)據(jù)）。 7. 結(jié)果判定 1) 所獲得的每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值 的平均值（B）除以*個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0 標(biāo)準(zhǔn)）的吸 光度值（B0）再乘以 100%，即百分吸光度值。 百分吸光度值（%）＝ B ×100% B0 以磺胺二甲基嘧啶準(zhǔn)品濃度值（ppb）為 X 軸， 百分吸光度值為 Y 軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖。相對(duì)應(yīng)每 一個(gè)樣品的濃度可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上讀出。也可以用 回歸方程法，計(jì)算出樣本溶液濃度。利用計(jì)算機(jī)專(zhuān) 業(yè)軟件，更便于大量樣品的快速分析。 2） 樣品的實(shí)際濃度為讀數(shù)結(jié)果乘以相應(yīng)稀釋倍 數(shù)。 8. 注意事項(xiàng) 1） 室溫低于20℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫（20- 25℃）會(huì)導(dǎo)致數(shù)值偏低。 2) 在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥過(guò)久的情況， 則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)不成線(xiàn)性，重復(fù)性不好的現(xiàn) 象。所以洗板排干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。 3) 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和顯色液對(duì)光敏感，避免直接暴露在 光線(xiàn)下。 4) 混合要均勻，洗板要*（包括加樣品和標(biāo)準(zhǔn) 液的時(shí)候都必需充分混合均勻）。 5) 反應(yīng)停止液為強(qiáng)酸性物質(zhì)，避免接觸皮膚。 6) 不要使用過(guò)了有效期的試劑盒，也不要稀釋或 攙雜使用不同生產(chǎn)廠家的試劑盒這樣會(huì)引起 靈敏度降低。 7) 試劑盒的儲(chǔ)存條件是2-8℃，切勿冷凍。 9. 檢測(cè)方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度 1) 試劑盒靈敏度：1ppb 2) 樣本低檢測(cè)限： 血 清………………4ppb 組織、蜂蜜………………………1ppb牛 奶………………………………20ppb 回收率： 血 清 …………………………90±10% 組織、蜂蜜……………………………85±10% 牛 奶……………………………80±10% 精密度： 試劑盒的變異系數(shù)均小于 10%