單克隆抗體多克隆抗體定制
1. 重組蛋白定制
(1)原核表達系統(tǒng):
將克隆化基因插入合適載體后導入原核生物用于表達大量蛋白質(zhì)的方法一般稱為原核表達。主要包括:大腸桿菌表達系統(tǒng)、枯草芽孢桿菌表達系統(tǒng)、鏈霉菌表達系統(tǒng)等,其中應用廣泛的是大腸桿菌表達系統(tǒng)。
(2)酵母表達 :
酵母表達系統(tǒng)是研究真核蛋白質(zhì)表達和分析的有力工具,擁有轉(zhuǎn)錄后加工修飾功能,適合于穩(wěn)定表達有功能的外源蛋白質(zhì)。與昆蟲表達系統(tǒng)和哺乳動物表達系統(tǒng)相比,酵母表達系統(tǒng)操作簡便,成本低廉,可大規(guī)模進行發(fā)酵。
(3)哺乳動物細胞表達:
哺乳動物細胞表達系統(tǒng)的優(yōu)勢在于能夠指導蛋白質(zhì)的正確折疊,提供復雜的N型糖基化和準確的O型糖基化等多種翻譯后加工功能,因而表達產(chǎn)物在分子結(jié)構(gòu)、理化特性和生物學功能方面接近于天然的高等生物蛋白質(zhì)分子。
目前已有許多重要的蛋白及糖蛋白利用哺乳動物細胞表達系統(tǒng)大量制備、生產(chǎn)。如:人組織型血纖蛋白酶原激活因子、凝血因子Ⅷ、干擾素、乙肝表面抗原、紅血球生成激素、人生長激素等。
2. 單克隆抗體制備
抗原上可以引起機體產(chǎn)生抗體的分子結(jié)構(gòu),叫做抗原決定簇,抗原通常是由多個抗原決定簇組成的。單克隆抗體是針對專一的抗原決定簇產(chǎn)生的抗體,主要原理是利用產(chǎn)生抗體的B淋巴細胞與腫瘤細胞雜交融合成雜交瘤細胞,來生產(chǎn)抗體。
3. 多克隆抗體制備
抗原上可以引起機體產(chǎn)生抗體的分子結(jié)構(gòu),叫做抗原決定簇,抗原通常是由多個抗原決定簇組成的,由多種抗原決定簇刺激機體,相應地就產(chǎn)生各種各樣的單克隆抗體,這些單克隆抗體混雜在一起就是多克隆抗體,機體內(nèi)所產(chǎn)生的抗體就是多克隆抗體;同樣一類抗原決定簇,也可刺激機體產(chǎn)生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五類抗體。
4. 蛋白純化
包涵體變復性
親和層析、離子交換層析、凝膠過濾層析、疏水層析純化規(guī)模:毫克-克級
蛋白除菌、除內(nèi)毒素
蛋白凍干