化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
AGL1(pSoup)菌株為 C58, RecA 型背景，核基因中含有篩選標(biāo)簽——利f平抗性基因 Rif 和羧芐青
m素抗性基因 Carb，為了便于轉(zhuǎn)化操作，此菌株攜帶一無(wú)自身轉(zhuǎn)運(yùn)功能的琥珀堿型 Ti 質(zhì)粒
pTiBo542DT-DNA，此質(zhì)粒含有 vir 基因（vir 基因是 T-DNA 插入植物基因組必需的元件，
pTiBo542DT-DNA質(zhì)粒自身的 T-DNA轉(zhuǎn)移功能被破壞，但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體 T-DNA順利轉(zhuǎn)
移）。在 AGL1 菌株中轉(zhuǎn)入 help 質(zhì)粒：pSoup 即為 AGL1 (pSoup)菌株，可幫助 pGreen，62SK，
pGs2 系列質(zhì)粒在農(nóng)桿菌中復(fù)制，同時(shí)賦予該菌株四環(huán)素（Tet）抗性。適用于擬南芥、煙草、玉米、
土豆等植物的轉(zhuǎn)基因操作，pGs2(卡那m素抗性)質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率≥ 104 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組成
組分
AGL1（pSoup）
化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
10 ×100 μL
100 ×100 μL
定制
基因型：C58 RecA (RifR/CarbR) Ti pTiBo542DT-DNA Succinamopine (pSoup-TetR)
存儲(chǔ)條件
-80 ℃保存; 請(qǐng)勿將本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
質(zhì)量控制
除琥珀堿型 Ti 質(zhì)粒 pTiBo542DT-DNA 和 pSoup 質(zhì)粒外，無(wú)外源質(zhì)粒 DNA 殘留；
化學(xué)法轉(zhuǎn)化效率≥104 cfu/μg pGs2 DNA。
使用方法
1. 將感受態(tài)細(xì)胞從-80 ℃中取出，在手心融化成冰水混合物，置于冰水浴中；
2. 將待轉(zhuǎn)化 DNA 加入到 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞中，用手撥管底混勻，依次于冰上靜置 10 分鐘、液氮 5 分
鐘（或干冰乙醇浴和-80℃冰凍）、37℃水浴 5 分鐘、冰浴 5 分鐘；
3.加入 900 μl 無(wú)抗生素的 YEB 液體培養(yǎng)基，于 28℃振蕩培養(yǎng) 2~3 小時(shí)；
4. 6000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的 YEB 平板
上，倒置放于 28 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 2-3 天（當(dāng)平板只含有 50 μg/ml Kan 時(shí)，28 ℃培養(yǎng) 48 h 即可；平板中同
時(shí)加入 50 μg/ml Kan，20 μg/ml Rif 時(shí)，需 28 ℃培養(yǎng) 60 h；如果使用的平板含有 50 μg/ml Rif 則需要 28 ℃
培養(yǎng) 72-90 h）。
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞解凍后應(yīng)立即使用；
2. 加入的待轉(zhuǎn)化 DNA 的總體積不應(yīng)超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞體積的 1/10；
3. 利f平濃度不應(yīng)高于 25 μg/μl，利f平濃度過(guò)高不利于農(nóng)桿菌生長(zhǎng)，會(huì)降低其生長(zhǎng)速度和轉(zhuǎn)化效率。
4.因?yàn)?nbsp;Ti 質(zhì)粒丟失的概率極低（可以忽略），所以一般培養(yǎng)農(nóng)桿菌時(shí)不考慮添加相應(yīng)抗生素。
化工儀器網(wǎng)