注意了,高效液相色譜儀柱壓問題及解決方法看這里
柱壓問題是使用高效液相色譜過程中需要密切注意的地方,柱壓的穩(wěn)定與色譜圖峰形的好壞、柱效、分離效果及保留時間等密切相關(guān)。
所謂柱壓穩(wěn)定并不是指壓力值穩(wěn)定于一個恒定值而是指壓力波動范圍在345kPa 以內(nèi)或在50PSI之間(在使用梯度洗脫時,柱壓平穩(wěn)緩慢的變化是允許的)。壓力過高、過低都屬于柱壓問題。
1 壓力過高
這是高效液相在使用中常見的問題,指的是壓力突然升高。
1).一般都是由于流路中有堵塞的原因。此時,我們應(yīng)該分段進(jìn)行檢查。
(1).首先斷開真空泵的入口處,此時PEEK管里充滿液體,使PEEK管低于溶劑瓶,看液體是否自由滴下,如果液體不滴或緩慢滴下,則是溶劑過濾頭堵塞。處理方法:用30%的硝酸浸泡半個小時,在用超純水沖洗干凈。如果液體自由滴下,溶劑過濾頭正常,在檢查;
(2).打開Purge閥,使流動相不經(jīng)過柱子,如果壓力沒有明顯下降,則是過濾白頭堵塞。處理方法:將過濾白頭取出,用10%的異丙醇超聲半個小時。如果壓力降至100PSI以下,過濾白頭正常,在檢查;
(3).把色譜柱出口端取下,如果壓力不下降,則是柱子堵塞。處理方法:如果是緩沖鹽堵塞,則用95%的水沖至壓力正常。如果是一些強(qiáng)保留的物質(zhì)導(dǎo)致堵塞,則要用比現(xiàn)在流動相更強(qiáng)的流動相沖至壓力正常。
假如按上面的方法長時間沖洗壓力都不下降,則可考慮將柱子的進(jìn)出口反過來接在儀器上,用流動相沖洗柱子。這時,如果柱壓仍不下降,只有換柱子入口篩板,但一旦操作不甚,很容易造成柱效下降,所以盡量少用。問題無法解決可考慮更換色譜柱。
2).流速設(shè)定不正確:可重新設(shè)定正確流量。
3).流動相配比不正確:不同配比的流動相其黏度系數(shù)不相同,較高黏度的流動相相應(yīng)的系統(tǒng)壓力也大,如果可能可更換黏度較小的溶劑或重新設(shè)定配比。
4).系統(tǒng)壓力零點漂移:調(diào)節(jié)壓力傳感器的零點。
2壓力過低
1).一般是由于系統(tǒng)泄漏,處理方法:尋找各個接口處,特別是色譜柱兩端的接口,把泄漏的地方旋緊即可。拆下柱子加適當(dāng)力擰緊或襯四氟薄膜。
2).泵里進(jìn)了空氣,但此時表現(xiàn)的往往是壓力不穩(wěn),忽高忽低,更嚴(yán)重一點會導(dǎo)致泵無法吸上液體。處理方法:打開Purge閥,用3~5ml/min的流速沖洗,如果不行,則要用針筒在排空閥處借住外力將氣泡吸出。
3).無流動相流出:檢查儲液瓶中有無流動相,沉子是否浸在流動相中,泵是否運行。
4).參比閥未關(guān)閉:將流速降低后關(guān)閉參比閥。一般降至0.1~0.2mL/min后關(guān)閉參比閥。