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實(shí)驗(yàn)材料

GenoSPYD過(guò)濾試劑盒（Blue DNA Compaion公司，法國(guó)）；

Precellys Evolution組織研磨器（Bertin公司，法國(guó)）；

MagSPYD自動(dòng)化核酸提取平臺(tái)（Blue DNA Compaion公司，法國(guó)）;

MIC PCR儀；

GenoSPYD針對(duì)Enterococcus spp與E.coli的q-PCR定量試劑盒。

實(shí)驗(yàn)程序

1.微生物樣品收集：每個(gè)樣品被0.45μm的濾膜過(guò)濾。之后將濾膜裝到GenoSPYD裂解管中，并加入1.5mlGenoSPYD細(xì)菌裂解緩沖液；

2.將裂解管放入到Precellys Evolution組織研磨器中，研磨程序?yàn)檗D(zhuǎn)速6500rpm、3個(gè)循環(huán)、每個(gè)循環(huán)研磨45s、循環(huán)間歇30s；

3.RNA提取：包含RNA的溶菌產(chǎn)物使用GenoSPYD RNA提取試劑盒進(jìn)行純化，可在MagSPYD自動(dòng)化核酸提取平臺(tái)進(jìn)行；

4.在MIC PCR儀上進(jìn)行qRT-PCR的檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖1為對(duì)Enterococcus spp檢測(cè)的qRT-PCR放大曲線(xiàn)結(jié)果，

表1為水中腸球菌Enterococcus spp與大腸桿菌E.coli的LOQ(定量檢測(cè)限)和LOD（檢測(cè)下限）的結(jié)果。

結(jié)論

GenoSPYD自動(dòng)化產(chǎn)品解決方法配合Precellys組織研磨器可以在3小時(shí)內(nèi)快速檢測(cè)和定量活微生物樣本中一些特定如大腸桿菌、腸球菌、葡萄球菌、假單胞菌的RNA含量等。此方法的水質(zhì)檢測(cè)指標(biāo)可以達(dá)到100CFU，同時(shí)也被世界著名水務(wù)公司Suez Environment蘇伊士環(huán)境集團(tuán)認(rèn)證。

細(xì)菌樣本裂解程度直接決定了之后提取RNA的效率，Precellys Evolution研磨儀具備高性能、高效率、安全等特點(diǎn)，同時(shí)有冷卻裝置Cryolys Evolution，可使整個(gè)研磨過(guò)程的溫度準(zhǔn)確維持在0-10℃，加配無(wú)RNA酶的研磨kit，輕松實(shí)現(xiàn)穩(wěn)態(tài)RNA的提取，助力水源中細(xì)菌污染物的快速定量檢測(cè)，值得信賴(lài)！