菠蘿蛋白酶檢測試劑盒（福林酚微板法）

產(chǎn)品貨號: BA1567

產(chǎn)品規(guī)格: 100T

產(chǎn)品簡介：

菠蘿蛋白酶(Bromelain)簡稱菠蘿酶，亦稱鳳梨酶、鳳梨酵素等，是存在于菠蘿植株中的蛋白水解酶，可從菠蘿果莖、葉、皮提取出來，經(jīng)精制、提純、濃縮、酶固定化、冷凍干燥而得到，菠蘿蛋白酶已被廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥等行業(yè)。利用吸附力、離子鍵、共價(jià)鍵等不同的聯(lián)結(jié)方式，將酶與不溶性載體聯(lián)結(jié)，制成固定化酶，可以很好的避免酶的失活，易于儲存運(yùn)輸。

菠蘿蛋白酶檢測試劑盒(福林微板法)檢測原理是通過蛋白酶催化底物酪蛋白，后者水解生成酪氨酸，酪氨酸含有酚羥基，可與福林試劑發(fā)生福林反應(yīng)，即福林試劑在堿性條件下容易定量的被酚類化合物還原，生成鎢藍(lán)和鉬藍(lán)的混合物，呈現(xiàn)不同深淺的藍(lán)色。于酶標(biāo)儀檢測吸光度，以吸光度的大小與酪氨酸含量的多少有關(guān)，吸光度大說明酪氨酸含量高，也就是說菠蘿蛋白酶分解的酪蛋白多，酶活性高。該試劑盒主要用于植物組織尤其時(shí)菠蘿的勻漿液中菠蘿蛋白酶活性，尤其適用于檢測菠蘿中菠蘿蛋白酶活性。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1.        蒸餾水

2.        研缽或勻漿器

3.        離心管

4.        離心機(jī)

5.        酶標(biāo)板

6.        酶標(biāo)儀

操作步驟（僅供參考）：

1.        準(zhǔn)備樣品：?

①植物樣品：取菠蘿肉或植物組織，切碎后在研缽或勻漿器中加入等體積組織勻漿液進(jìn)行研磨或勻漿，靜置，濾紙過濾或紗布過濾。留取濾液，邊攪拌邊加入Bromelain?Lysis?buffer，攪拌，靜置。離心，棄上清液，收集沉淀，加入Bromelain洗脫液，攪拌洗脫。離心，取上清液，凍存，用于菠蘿蛋白酶的檢測。?

②固定化酶：稱取適量的固定化酶，溶解于組織勻漿液，混勻，待用。?

③高活性樣品：如果樣品中含有較高活性的菠蘿蛋白酶，可以使用蒸餾水或組織勻漿液進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2.        制作酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)：取適量的酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)，按下表配制不同濃度的酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)備用。

3.        處理待測樣品：取兩支離心管，分別加入待測樣品。一支置于孵育后加入提前孵育的酪蛋白溶液，混勻，準(zhǔn)確孵育，立即加入酪蛋白終止液，迅速搖勻滅活，作為測定液。同時(shí)取另一支直接加入酪蛋白終止液，迅速搖勻滅活，加入提前孵育的酪蛋白溶液，混勻，準(zhǔn)確孵育，作為對照液。以上兩支含有測定液和對照液的離心管室溫放置。離心，分別取上清液待用。

4.        加樣：按照下表設(shè)置對照孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、測定孔。溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的菠蘿蛋白酶活性過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定。樣品的檢測最好能設(shè)置平行管，求平均值。

5.        菠蘿蛋白酶檢測：充分混勻，孵育顯色，立即以酶標(biāo)儀，以對照孔為對照，測定測定孔的吸光度。同時(shí)以酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)0號孔為空白對照，測定系列酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)(1-5號孔)的吸光度。

計(jì)算：

以酪氨酸濃度(mg/ml)為橫坐標(biāo)，以對應(yīng)的吸光度值為橫坐標(biāo)，繪制酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過橫坐標(biāo)的吸光度值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得各測定孔中酪氨酸濃度(mg/ml)。

菠蘿蛋白酶活性單位的定義：在該實(shí)驗(yàn)條件下，水解酪蛋白產(chǎn)生酪氨酸所需的酶量為一個(gè)活性單位。其比活力定義：其每毫克蛋白所含蛋白酶活力單位得數(shù)量。

菠蘿蛋白酶(U)={測定管酪氨酸濃度×2×1000}/15

注意事項(xiàng):

1.        待測樣品中不能含有酶抑制劑，同時(shí)需避免反復(fù)凍融。

2.        菠蘿蛋白酶提取時(shí)，注意低溫操作，防止酶活性，亦可-20℃保存。

3.        如果沒有分光光度計(jì)，也可以使用普通的酶標(biāo)儀測定。每次檢測指標(biāo)不宜過多，否則操作時(shí)間不一，有可能導(dǎo)致樣本間的差異。

4.        離心時(shí)最好采用低溫離心機(jī)，常溫離心機(jī)也可。

有效期：6個(gè)月有效。