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細(xì)菌基因組提取試劑盒

產(chǎn)品貨號：27102

產(chǎn)品規(guī)格：50 次/100 次

產(chǎn)品簡介：

  本試劑盒采用新型硅基質(zhì)膜技術(shù)和試劑配方，通過快速簡單的結(jié)合-洗滌-洗脫三步即可從細(xì)菌中提取基 因組，每個吸附柱至多可吸附 10μg 的 DNA，同時大限度的去除引物、寡核苷酸、酶等雜質(zhì)。純化提取的 基因組純度及濃度高，完整性好，可直接用于測序、連接和轉(zhuǎn)化、標(biāo)記、體外轉(zhuǎn)錄等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

包裝清單：

?自備試劑：無水乙醇。

操作步驟：

1. 收集適量細(xì)菌于 1.5ml 離心管中，8000rpm 離心 5min，吸棄上清。加入 400μl Re-Suspension Buffer 將 菌體重懸。

2. 8000rpm 離心 5min，吸棄上清留沉淀。加入 600μLLysis Buffer，用移液器輕輕吹勻后于 60℃孵育 5min。

3. 室溫靜置 5min，加入 RNase A 2μl，上下顛倒混勻 3 次，37℃孵育 20min。

4. 柱平衡：向已裝入收集管（Collection Tubes）中的吸附柱（Spin Columns）中加入 200μl Buffer PS，12000 rpm 離心 1 分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

5. 將步驟 3 或 4 所得溶液加入到已裝入收集管的吸附柱中，室溫放置 2 分鐘，12000 rpm 離心 1 分鐘，倒 掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。

6. 向吸附柱中加入 450 μl Buffer PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12000 rpm 離心 1 分鐘， 倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放回收集管中。

7. 注意：如果純化的 DNA 用于鹽敏感的實(shí)驗(yàn)（例如平末端連接或直接測序），建議加入 Buffer PW 靜置 2-5 分鐘再離心。

8. 重復(fù)步驟 6。

9. 12000 rpm 離心 1 分鐘，倒掉收集管中的廢液。

10. 注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶促反應(yīng)（酶切、PCR 等）。

11. 將吸附柱放到一個新的 1.5 ml 離心管（自備）中，向吸附膜中間位置懸空滴加 50μlBuffer EB，室溫放 置 2 分鐘。12000 rpm 離心 1 分鐘，收集 DNA 溶液。-20℃保存 DNA。

注意：

? (1)洗脫液的 pH 值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液，應(yīng)保證其 pH 值在 7.0-8.5 之間（可以用 NaOH 將水的 pH 值調(diào)到此范圍）。

(2)為了提高基因組的提取量，可將離心得到的溶液重新加到吸附柱中，室溫放置 2 分鐘，13,000 rpm 離心 1 分鐘。

(3)洗脫體積不應(yīng)小于 30μl，體積過少會影響回收效率。

注意事項(xiàng)：

1. *使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明在 Buffer PW 中加入無水乙醇。

2. 所有離心步驟均可室溫下進(jìn)行。