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淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基（放射工作人員體檢）

產(chǎn)品名稱(chēng)：

通用名稱(chēng)：淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基

英文名稱(chēng)：Lymphocyte Medium

包裝規(guī)格：4ml/瓶，56 瓶/盒

預(yù)期用途：

  本產(chǎn)品為細(xì)胞標(biāo)本前處理試劑，用于淋巴細(xì)胞增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)后的淋巴細(xì)胞用于體外診斷，該產(chǎn)品不用于 治療性用途。

主要組成成分：

  RPMI1640、小牛血清、肝素、PHA 等。

使用方法：

1. 采血與接種

  采取外周血 1-2ml，在無(wú)菌條件下立即種血 0.3ml（7 號(hào)針頭約 20 滴）至淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)，充分搖勻。

2. 培養(yǎng)

  將培養(yǎng)瓶放入 37℃恒溫箱中培養(yǎng) 48-52 小時(shí)，培養(yǎng)期間注意觀(guān)察培養(yǎng)基有無(wú)凝血、溶血或長(zhǎng)菌的現(xiàn)象 （可培養(yǎng) 24 小時(shí)后將培養(yǎng)基輕搖一次，以便細(xì)胞可以獲得充分的營(yíng)養(yǎng)）。

3. 制片

3.1 秋水仙素處理：

  在終止培養(yǎng)前 24h，加入濃度為 10μg/ml 的秋水仙素 1-3 滴（7#針頭豎滴）后，繼續(xù)培養(yǎng) 24 小時(shí)；

3.2 收細(xì)胞：

  將培養(yǎng)完成的培養(yǎng)基倒入對(duì)應(yīng)的離心管內(nèi)，以 1500rpm 離心 7-10 分鐘，棄去上清液；

3.3 低滲：

  向離心管內(nèi)加入 37℃預(yù)溫的低滲液（0.075mol/L 氯化/鉀溶液）8ml，用吸管反復(fù)吹勻 10 次，置 37℃水浴箱中水 浴 25-35 分鐘；

3.4 預(yù)固定：

  向低滲的細(xì)胞懸液內(nèi)緩慢加入新配制的固定液（甲醇和乙酸按 3:1 的比例混合）1-1.5ml，輕輕混勻后 1500rpm 離 心 7-10 分鐘，棄去上清液；

3.5 固定：

沿管壁緩慢加入現(xiàn)配的新配固定液約 8ml 輕輕混勻，置室溫放置 20 分鐘，然后 1500rpm 離心 8 分鐘，棄上清。 加入固定液再重復(fù)固定一次。用固定液將沉淀調(diào)成細(xì)胞懸液（不宜太濃，一般加固定液至 0.3ml）在冰片或 37℃ 預(yù)溫的玻片上滴片，每張片上滴 2 滴。

4. 染色

  滴片自然干燥后用 10%的吉姆薩染液中染色 10 分鐘，自來(lái)水沖洗干凈，用吹風(fēng)機(jī)吹干或自然干燥后，即可閱片。

注意事項(xiàng)：

1. 采集的外周血若立即接種則無(wú)需加肝素抗凝，如需保存標(biāo)本，應(yīng)加肝素抗凝；

2. 采集的外周血在冰箱 4℃保存，保存期不亦超過(guò) 72h。

儲(chǔ)存條件及有效期：

  4-8℃保存，有效期 1 個(gè)月，-5℃以下保存，有效期 12 個(gè)月，可穩(wěn)定至保質(zhì)期末。