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細胞培養(yǎng)是雜交瘤制備單克隆抗體過程中不能缺少的實驗操作，細胞培養(yǎng)是一個困難重重的事情，多少英雄都在細胞培養(yǎng)上自掛東南枝，本文就細胞培養(yǎng)的步驟及注意事項做一描述。

細胞培養(yǎng)步驟：

一、復蘇

1. 把凍存管從液氮中取出來，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動。液體都融化后(大概1-1.5分鐘)，拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。 2. 把上述細胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中(用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細胞都洗下來)，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。 3. 把上清液倒掉，加1ml培養(yǎng)基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動，使培養(yǎng)皿中的細胞均勻分布。 4. 標好細胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等，放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細胞貼壁后換培養(yǎng)基。 5. 3天換一次培養(yǎng)基。

二、傳代

1. 培養(yǎng)皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。 2. 把原有培養(yǎng)基吸掉。 3. 加適當?shù)囊鹊鞍酌?能覆蓋細胞就行)，消化1-2分鐘。 4. 細胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。 5. 用移液槍吹打細胞，把細胞都懸浮起來。 6. 把細胞吸到15ml的離心管中，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。 7. 倒掉上清液，加1-2ml培養(yǎng)基，把細胞都吹起來。 8. 根據(jù)細胞種類把細胞傳到幾個培養(yǎng)皿中。一般，癌細胞分5個，正常細胞傳3個。繼續(xù)培養(yǎng)。

三、 凍存

把細胞消化下來并離心(同上)。用配好的凍存液把細胞懸浮起來，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鐘，寫明細胞種類，凍存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃過夜，然后放到液氮灌中保存。凍存液的配制： 70%的*培養(yǎng)基+20?S+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。