分析 GFP 融合蛋白——在試管中
熒光融合蛋白是研究蛋白質(zhì)定位和細(xì)胞動(dòng)力學(xué)的常用工具。這些構(gòu)建體通常將靶蛋白的全部或至少一個(gè)功能域融合到多種類型的報(bào)告熒光蛋白中的一種。初來自水母A. victoria的那些被稱為綠色熒光蛋白，或 GFP。使用 GFP 融合蛋白構(gòu)建體對(duì)細(xì)胞進(jìn)行成像很容易，但為了獲得完整的圖像，此類成像數(shù)據(jù)通常與感興趣的蛋白質(zhì)（或蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域）的其他生化信息相結(jié)合。對(duì)于此類生化實(shí)驗(yàn)，通常使用允許純化的不同“標(biāo)簽"域設(shè)計(jì)第二種融合蛋白。這些額外的體外分析可用于確認(rèn)“標(biāo)記"融合構(gòu)建體的功能，以及提取可能在細(xì)胞環(huán)境中形成的多蛋白復(fù)合物。缺乏特異性、可靠和有效的試劑限制了 GFP 和相關(guān)熒光融合蛋白在細(xì)胞生物學(xué)研究和直接生化分析中的使用。

GFP-Traps 利用與瓊脂糖珠或磁性瓊脂糖珠偶聯(lián)的超高親和力羊駝抗體片段。這些“納米抗體陷阱"非常適合免疫沉淀、免疫純化和免疫下拉實(shí)驗(yàn)，其純度（和產(chǎn)量）比傳統(tǒng)小鼠單克隆抗體高 10 倍。Nanobody-Trap 與多種源材料兼容，可用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞、組織和器官、細(xì)菌、酵母甚至植物。這些試劑使您的 GFP 融合成為免疫沉淀、Co-IP、質(zhì)譜、酶活性測(cè)量和 ChIP 分析的好候選者。

GFP-Trap 親和試劑非常適合對(duì)這些熒光融合蛋白及其相互作用因子進(jìn)行快速、清潔和高效的一步免疫純化。自 2008 年開始生產(chǎn)，數(shù)千篇已發(fā)表的引文證明了它們的廣泛用途和有效性，我們邀請(qǐng)您免費(fèi)試用這種*的試劑。它們已成為整個(gè)歐洲和北美細(xì)胞生物學(xué)研究的主要內(nèi)容。

GFP-Trap 的親和力明顯高于大多數(shù)抗體，并且在一系列融合蛋白濃度上具有驚人的 Kd！

看看客戶對(duì) GFP-Trap 試劑的評(píng)價(jià)！

蛋白質(zhì)復(fù)合物無法躲避納米抗體陷阱
右側(cè)是使用與磁性顆粒 (GFP-Trap M) 和瓊脂糖珠 (GFP-Trap A) 結(jié)合的 GFP-Trap 的結(jié)果。GFP-Trap A 和 GFP-Trap 

M 的比較先通過簡(jiǎn)單的 1 步下拉天然 GFP 與來自 293T 細(xì)胞提取物的 GFP-Trap A 和 GFP-Trap M 進(jìn)行。輸入 (I) 和

結(jié)合 (B) 級(jí)分通過 SDS-PAGE 分離，然后進(jìn)行考馬斯染色。正如預(yù)期的那樣，含有 GFP 的結(jié)合部分非常純凈。然后在共

免疫沉淀實(shí)驗(yàn)中將相同的 1 步純化程序應(yīng)用于與蛋白質(zhì) PCNA 融合的 GFP。這一次，嵌合體和任何相關(guān)蛋白

都可以用來自 293T 細(xì)胞提取物的 GFP-Trap A 和 GFP-Trap M 非常有效地純化。從凝膠中可以看出，附加條帶代表

 GFP-PCNA 的潛在結(jié)合伙伴。

以低水平表達(dá)的蛋白質(zhì)的免疫沉淀 (IP) 無法與 GFP-Trap 匹配
下面是各種濃度的 EGFP 與 GFP-Trap 瓊脂糖的免疫沉淀。
將 4 種確定量的 EGFP 加標(biāo)到 500 µL 稀釋的 HEK293T 細(xì)胞裂解液中。IP 根據(jù) GFP-Trap 手冊(cè)進(jìn)行，結(jié)合的 EGFP 用 

2x SDS 樣品緩沖液洗脫。通過 SDS-PAGE 和蛋白質(zhì)印跡 (WB) 分析輸入 (I)、流過 (FT) 和結(jié)合 (B) 級(jí)分。

<ｉｆｒａｍｅ loading="lazy" src="https://www.youtube.com/embed/k5QOHWUntdo" width="460" height="260" frameborder="0" allowfullscreen="allowfullscreen" style="box-sizing: border-box;">          

你實(shí)驗(yàn)室喜歡的味道是什么？
Nanobody-Trap 是與單價(jià)基質(zhì)（瓊脂糖珠、磁性顆粒）偶聯(lián)的高質(zhì)量結(jié)合蛋白，用于對(duì)許多融合蛋白及其相互作用伙

伴進(jìn)行生化分析。不同的格式允許您進(jìn)行大量的實(shí)驗(yàn)。流行的形式是與瓊脂糖珠相連的納米抗體陷阱。瓊脂

糖珠提供大的結(jié)合能力和小的背景，同時(shí)仍然易于使用。如果自動(dòng)化對(duì)您的實(shí)驗(yàn)室很重要，那么磁性瓊脂糖顆粒

是一個(gè)不錯(cuò)的選擇。純化的蛋白質(zhì)復(fù)合物與質(zhì)譜分析等下游分析兼容。

Nanobody-Traps 已經(jīng)檢查了超過 50 種熒光蛋白，點(diǎn)擊查看！

駱駝科單域抗體就像類固醇上的 IgG

被稱為駱駝科的動(dòng)物家族（駱駝、美洲駝和羊駝）產(chǎn)生沒有輕鏈的功能性抗體，即所謂的“重鏈"抗體。這些重鏈

抗體通過單個(gè)可變結(jié)構(gòu)域識(shí)別并結(jié)合其抗原。當(dāng)從它們的羧基尾部切下時(shí)，這些桶狀結(jié)構(gòu) (2×3 nm) 非常小、

天然存在且完整的抗原結(jié)合片段 (MW 為 13 kDa)。這些稱為納米抗體的片段具有高特異性、低納摩爾范圍內(nèi)的親和

力和亞納摩爾范圍內(nèi)的解離常數(shù)（通常比小鼠 IgG 好 10 到 100 倍）的特點(diǎn)。納米抗體的緊湊尺寸使其在高達(dá) 70°C 的

溫度下極為穩(wěn)定，即使在 2M NaCl 或 0.5% SDS 中也能發(fā)揮作用。這些小而強(qiáng)大的抗體片段可用于各種*的應(yīng)用。他

們將打開您的研究可能性。