一種在發(fā)生細(xì)胞凋亡時(shí)量化細(xì)胞凋亡的非侵入性方法

新的 Lamin Chromobody Immunodetection Vector 是細(xì)胞凋亡高內(nèi)涵分析 (HCA) 的一項(xiàng)重大突破，因?yàn)槠渌治?/span>

依賴于靜態(tài)終點(diǎn)分析。核層是包裹整個(gè)細(xì)胞核并支撐核膜的支架。它的功能是將核內(nèi)容結(jié)合在一起并為核增加機(jī)械支持。

核層有助于保持結(jié)構(gòu)剛性和形態(tài)變化之間的平衡。因此，人工摻入過(guò)表達(dá)和熒光標(biāo)記的核纖

層蛋白通常會(huì)導(dǎo)致不希望的細(xì)胞毒性副作用。新的 Lamin Chromobody 克服了這種不需要的副作用。

Lamin Chromobody 的小尺寸產(chǎn)生了高信噪比，用于令人驚嘆的高分辨率圖像或核層動(dòng)力學(xué)的延時(shí)電影。值得注意的

是，它對(duì)細(xì)胞功能沒(méi)有影響，并且對(duì)大多數(shù)細(xì)胞類型表現(xiàn)出極低的毒性。只需使用 Lamin Chromobody 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染您選

擇的細(xì)胞系。該質(zhì)粒包含與 TagGFP2 (Evrogen) 融合的 Lamin 特異性羊駝抗體序列。轉(zhuǎn)化后，您的細(xì)胞將表達(dá) Lamin 

Chromobody。細(xì)胞核的外圍將發(fā)出強(qiáng)烈的環(huán)狀形式的熒光，因?yàn)闊晒馍w分子特異性地定位于椎板表面。這種瞬時(shí)結(jié)合

不會(huì)影響細(xì)胞活力或核相關(guān)過(guò)程，從而為您提供了一種*的可能性，可以在活細(xì)胞顯微鏡檢查期間監(jiān)測(cè)核完整性和形態(tài)

，作為細(xì)胞健康和活力的指標(biāo)。您還可以將 Lamin Chromobody 用作生物傳感器，用于實(shí)時(shí)檢測(cè)有絲分裂或細(xì)胞凋亡。

有絲分裂細(xì)胞的共聚焦活細(xì)胞成像

HeLa（左）和 U2OS（右）細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)融合到 TagGFP2 的 Lamin Chromobody。經(jīng)歷有絲分裂的細(xì)胞顯示出典型

的邊緣狀結(jié)構(gòu)（G 期）、核層解聚（前中期）和有絲分裂結(jié)束時(shí)的重組（末期）。

用 Lamin-Chromobody 進(jìn)行細(xì)胞凋亡測(cè)定

使用融合到 TagGFP2 的 Lamin Chromobody Lamin Chromobody 對(duì)未經(jīng)處理的細(xì)胞（左）和添加 5 µM 星形孢菌素 (STS)（右）進(jìn)行延時(shí)成像。請(qǐng)注意在用 STS 處理細(xì)胞后在細(xì)胞凋亡過(guò)程中觀察到的特征性“爆炸"片段。

通過(guò)自動(dòng)圖像采集和計(jì)算模式識(shí)別進(jìn)行定量評(píng)估。以 15 分鐘的間隔監(jiān)測(cè)椎板的形態(tài)變化（如用 Lamin Chromo

body 檢測(cè)的），如碎裂和囊泡形成。顯示了在 20 小時(shí)內(nèi)用濃度增加的 STS (0-5 µM) 處理后凋亡細(xì)胞的百分比。

染色體將你的細(xì)胞變成免疫報(bào)告工廠

納米抗體是*的小抗體片段，可與靶蛋白非常有效地結(jié)合。在動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)的納米抗體可以被收集并用于體外

研究。當(dāng)納米抗體被表達(dá)為與 GFP 等報(bào)告分子的融合體時(shí)，發(fā)生了一些意想不到的事情。新形成的 Chromobody 直接與制造它的細(xì)胞內(nèi)的目標(biāo)結(jié)合。此外，使用正確的載體和啟動(dòng)子，結(jié)合具有高特異性和低背景。這為 GFP 與感興趣的蛋白質(zhì)融合提供了一個(gè)非常好的替代方案，用于免疫定位研究。為什么？因?yàn)?GFP 和 RFP 融合已被證明可以阻斷或改變?nèi)诤系鞍椎幕钚浴Ｏ啾戎拢?/span>

駱駝科單域抗體就像類固醇上的 IgG

被稱為駱駝科的動(dòng)物家族（駱駝、美洲駝和羊駝）產(chǎn)生沒(méi)有輕鏈的功能性抗體，即所謂的“重鏈"抗體。這些重鏈抗體通過(guò)單個(gè)可變結(jié)構(gòu)域識(shí)別并結(jié)合其抗原。當(dāng)從它們的羧基尾部切下時(shí)，這些桶狀結(jié)構(gòu) (2x3 nm) 非常小、天然存在且完整的抗原結(jié)合片段 (MW 為 13 kDa)。這些稱為納米抗體的片段具有高特異性、低納摩爾范圍內(nèi)的親和力和亞納摩爾范圍內(nèi)的解離常數(shù)（通常比小鼠 IgG 好 10 到 100 倍）的特點(diǎn)。納米抗體的緊湊尺寸使其在高達(dá) 70°C 的溫度下極為穩(wěn)定，即使在 2M NaCl 或 0.5% SDS 中也能發(fā)揮作用。這些小而強(qiáng)大的抗體片段可用于各種*的應(yīng)用。他們將打開(kāi)您的研究可能性。