讓您的 GFP、RFP、組蛋白和波形蛋白真正發(fā)光
熒光蛋白是研究活細(xì)胞中蛋白質(zhì)定位和動(dòng)力學(xué)的有力工具。然而，綠色熒光蛋白（來自水母）和紅色熒光蛋白（來自蘑菇珊瑚）等蛋白質(zhì)是基因編碼而不是化學(xué)工程，繼承了一些普遍的缺點(diǎn)。來自以生理表達(dá)水平表達(dá) GFP 或 RFP 融合的細(xì)胞的固定樣本的信號(hào)強(qiáng)度通常非常低。此外，這些嵌合蛋白的光穩(wěn)定性和量子效率不足以用于超分辨率顯微鏡（例如 3D-SIM 或 STED）。許多細(xì)胞生物學(xué)方法，例如用于 BrdU 檢測的 HCl 處理、EdU-Click-iT™ 處理或 FiSH 的熱變性會(huì)導(dǎo)致 GFP 或 RFP 信號(hào)的中斷。GFP-Boosters 和 RFP-Boosters 非常小，對(duì) GFP 或 RFP 具有高度特異性的結(jié)合蛋白，并與 ATTO-TEC 的優(yōu)質(zhì)熒光染料共價(jià)偶聯(lián)。GFP/RFP 結(jié)合域源自我們常用的羊駝生產(chǎn)的專有納米抗體。Nanobody-Trap 親和試劑。Nano-Boosters 僅在固定細(xì)胞中提供更強(qiáng)和更穩(wěn)定的融合蛋白信號(hào)。GFP-Booster 和 RFP Booster 都與不同且非常有效的染料相連，從綠色到紅色，再到發(fā)射的遠(yuǎn)紅色。選擇非常適合您學(xué)習(xí)的那一款。與之前認(rèn)為的 GFP、RFP、組蛋白和波形蛋白融合蛋白相比，這些品種允許進(jìn)行更多的生長后分析。

上圖說明了 Nano-Boosters 如何與固定和透化細(xì)胞結(jié)合。該協(xié)議很簡單，結(jié)果通常是明確無誤的。

使用 GFP-Booster（左）和 RFP-Booster（右）增強(qiáng) GFP 和 RFP 信號(hào)。使用在 Nano-Booster 處理前后穩(wěn)定表達(dá)核 GFP 或 RFP 融合蛋白的 HeLa 細(xì)胞系進(jìn)行信號(hào)強(qiáng)度的比較。在用 Nano-Boosters 處理之前，將細(xì)胞固定并透化。

Nano-Boosters 適合我的實(shí)驗(yàn)嗎？
一般來說，與經(jīng)典的一抗/二抗技術(shù)相比，Nano-Boosters 在熒光強(qiáng)度方面的增加相似。Nano-Boosters 解決的常見問題可能是在 GFP 或 RFP 融合體暴露于強(qiáng)激發(fā)源時(shí)的光漂白校正。但它們解決的問題遠(yuǎn)不止這些，僅僅是因?yàn)樗鼈凅w積小。，協(xié)議更簡單；您只需要將一個(gè)微小分子與您的目標(biāo) GFP 融合體結(jié)合。這大限度地減少了對(duì)結(jié)構(gòu)的干擾并減少了由二抗引起的背景。它還縮短了協(xié)議，節(jié)省了您的時(shí)間。其次，納米助推器可以擠進(jìn)小地方，這樣 GFP 或 RFP 融合體上難以到達(dá)的抗原位點(diǎn)仍然可以很好地結(jié)合。第三，由于 Nano-Boosters 與抗體夾心復(fù)合物相比非常小，顯微鏡可以具有高分辨率水平，同時(shí)仍能提供準(zhǔn)確的定位/空間數(shù)據(jù)。好東西真的是小包裝的！

駱駝科單域抗體就像類固醇上的 IgG

被稱為駱駝科的動(dòng)物家族（駱駝、美洲駝和羊駝）產(chǎn)生沒有輕鏈的功能性抗體，即所謂的“重鏈"抗體。這些重鏈抗體通過單個(gè)可變結(jié)構(gòu)域識(shí)別并結(jié)合其抗原。當(dāng)從它們的羧基尾部切下時(shí)，這些桶狀結(jié)構(gòu) (2x3 nm) 非常小、天然存在且完整的抗原結(jié)合片段 (MW 為 13 kDa)。這些稱為納米抗體的片段具有高特異性、低納摩爾范圍內(nèi)的親和力和亞納摩爾范圍內(nèi)的解離常數(shù)（通常比小鼠 IgG 好 10 到 100 倍）的特點(diǎn)。納米抗體的緊湊尺寸使其在高達(dá) 70°C 的溫度下極為穩(wěn)定，即使在 2M NaCl 或 0.5% SDS 中也能發(fā)揮作用。這些小而強(qiáng)大的抗體片段可用于各種*的應(yīng)用。他們將打開您的研究可能性。