IRMM-311 地衣芽孢桿菌基因組標準品樣品描述每個小瓶包含一個瓊脂糖插入的地衣芽孢桿菌DSM 5749未消化的基因組DNA，用于PFGE。

本CRM旨在用于PFGE公司授權(quán)的益生菌飼料添加劑地衣芽孢桿菌DSM 5749的分類鑒定。所有程序中均應(yīng)使用分子生物學(xué)級（無菌、無DNA酶、RNA酶）消耗品和生物化學(xué)物質(zhì)。

用SfiI限制性內(nèi)切酶消化瓊脂糖插入物

-將IRMM-311的瓊脂糖插入物轉(zhuǎn)移到含有1 mL 10 mmol/L Tris-HCl緩沖液(pH 7.6)的1.5 mL試管中，并在室溫下孵育30 min。

-取出溶液，再加入1 mL 10 mmol/L Tris-HCl緩沖液(pH 7.6)，在室溫下再次孵育30 min。

-在不破壞插頭的情況下刪除解決方案。

-在室溫下插入兩次30 min的0.5 mL RE緩沖液中(使用RE和制造商選擇的適當緩沖液)。更新中間位置之間的限制緩沖區(qū)。

-刪除限制性緩沖區(qū)。

-添加到每個插入物：30μL 10×濃縮SfiI緩沖液，30 U SfiI，添加水到最終體積為300μL。

-在50°C下孵育15-17小時。

-小心除去溶液，加入1 mL ES溶液（0.5MEDTA pH 8.0,1%（m/v）月桂酰肌氨酸鈉）。

-在50下孵育過夜°C.

-取出溶液，加入250μL ESP(含蛋白酶K的ES，1 mg/mL)。

-在50時孵育2小時°C.-稀釋三硼酸鹽-EDTA(TBE)緩沖液(89 mmol/L三硼酸鹽，2 mmol/L EDTA，pH 8.3)，例如SigmaT7527，與體積比為1：3的蒸餾水（緩沖液：水）。

-除去溶液，加入1 mL稀釋的TBE緩沖液，在室溫下孵育1小時。插入物可以在4°C中保存幾天。

-取每個PFGE標準品D2291和D2416的1 mm瓊脂糖插入片，在1 mL稀釋的TBE中室溫孵育1小時。

存儲

IRMM-311 地衣芽孢桿菌基因組標準品樣品在使用前應(yīng)存儲在4°C下。然而，歐盟委員會不能對在客戶的場所儲存材料期間發(fā)生的變化負責(zé)，特別是對打開的樣品。

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