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【科捷儀器】大環(huán)內(nèi)酯類與氯霉素類藥物是兩類應(yīng)用廣泛的廣普抗生素，由于這兩類抗生素能夠有效預(yù)防和治療家畜傳染病和寄生蟲病的發(fā)生，有些還具有促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育的功用。因此，為了降低養(yǎng)殖成本，提高經(jīng)濟(jì)效益，在家畜養(yǎng)殖中廣為使用。但是，近年來由于在禽畜養(yǎng)殖過程中過量使用抗生素又不遵守休藥期的規(guī)定，在牛羊肉、豬肉以及雞鴨魚肉中檢測(cè)出了各種抗生素。這種殘留可以通過食物鏈進(jìn)入人體，進(jìn)而對(duì)人體造成各種危害。紅霉素、泰樂菌素等大環(huán)內(nèi)酯類可致肝損害和聽覺障礙。更嚴(yán)重的是長(zhǎng)期大量濫用廣譜抗生素會(huì)導(dǎo)致腸道微生物菌群被抑制，使人體產(chǎn)生抗藥性，這種抗藥性導(dǎo)致人類感染疾病之后治療難度加大，治療成本升高。

　　為了保障人類的生命健康，世界各國(guó)衛(wèi)生組織以及食品藥品監(jiān)督管理部門都已經(jīng)將肉食品中各種抗生素殘留量作了嚴(yán)格規(guī)定，并且以抗生素在肉食品中的殘留量作為產(chǎn)品進(jìn)口的貿(mào)易壁壘，如美國(guó)和歐盟對(duì)阿維菌素在肉食品中的zui高殘留*為25ug/kg，泰勒菌素為100ug/kg，替米考星為100ug/kg，伊維菌素為40ug/kg。目前肉食品中大環(huán)內(nèi)酯類抗生素常用液一質(zhì)聯(lián)用進(jìn)行全面分析。氯霉素類藥物常用氣相色譜及液相色譜分析。而用液相色譜法同時(shí)分析肉食品中兩類常見抗生素還未見文獻(xiàn)報(bào)道。

　　一、LC-10Tvp梯度液相色譜儀配置
LC-10Tvp高壓恒流泵：2臺(tái)
SPD-10Tvp紫外檢測(cè)器：1臺(tái) SCL-10Tvp 系統(tǒng)控制器：1臺(tái)7725i手動(dòng)進(jìn)樣閥： 1套 色譜工作站：1套    （VI2010、N2000、N3000選用）液相色譜柱：1支     （C18 4.6*250mn,5um）微量進(jìn)樣器：1支     （50ul/100ul）
   進(jìn)樣支架  ：1只     （進(jìn)樣閥用）

　　二、LC-10Tvp梯度液相色譜儀特點(diǎn)
　　LC-10Tvp梯度液相色譜儀是南京科捷分析儀器有限公司為了快速地滿足多樣化的客戶需求，在原有的STI501液相色譜儀的基礎(chǔ)上經(jīng)過優(yōu)化，利用美國(guó)*技術(shù)開發(fā)設(shè)計(jì)，國(guó)內(nèi)加工生產(chǎn)的的一款新型的液相色譜儀。LC-10Tvp等度液相色譜儀實(shí)現(xiàn)了人機(jī)對(duì)話，可實(shí)時(shí)對(duì)儀器的運(yùn)行狀態(tài)進(jìn)行監(jiān)控，并可對(duì)潛在和已出現(xiàn)的故障做出判斷，同時(shí)提供在線解決方案。該儀器也全面實(shí)現(xiàn)了遠(yuǎn)程的準(zhǔn)無人操作，大大提高了儀器的使用效率，同時(shí)通過高精度的AS1000自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化進(jìn)樣，zui大程度抑制了樣品的交叉污染，提供樣品分析精度。LC-10Tvp等度液相色譜儀可廣泛應(yīng)用于研究開發(fā)、醫(yī)藥檢驗(yàn)、食品檢測(cè)、化工分析、環(huán)境監(jiān)測(cè)等眾多分析領(lǐng)域。
　　主要特點(diǎn)    豐富的功能——符合客戶對(duì)分析的不同需求    硬件具有VP功能，記錄維護(hù)信息和操作記錄，符合GLP/GMP要求；系統(tǒng)控制器增具有時(shí)鐘、溫度計(jì)、濕度計(jì)等人性化設(shè)計(jì)的功能。    的性能——滿足客戶對(duì)儀器的嚴(yán)格要求    檢測(cè)器采用進(jìn)口氘燈、光電池以及1200條/mm凹面光柵組成的雙光束單色器；精密加工的雙透鏡流通池，控制波長(zhǎng)調(diào)節(jié)的高精度微處理器以及雙路高速的采樣頻率，確保了低噪聲、低漂移及超高靈敏度等特點(diǎn)。    VI2010工作站符合多種法規(guī)要求。
　　可靠的結(jié)果——滿足客戶對(duì)結(jié)果的準(zhǔn)確要求    與進(jìn)口儀器做對(duì)比試驗(yàn),分析結(jié)果具有高度的一致性。
　　簡(jiǎn)便的操作——便于客戶對(duì)軟件的熟練操作    軟件采用多窗口模式，操作方便。    精美的外觀——滿足客戶對(duì)儀器的視覺要求    外形精美，帶來視覺上的享受。技術(shù)指標(biāo) 

　　三、實(shí)驗(yàn)
　　1 儀器與試劑
　　南京科捷 LC-10Tvp高壓恒流泵
　　SPD-10Tvp紫外檢測(cè)器
　　超聲波清洗儀
　　反相色譜柱C18
　　固相萃取柱
　　泰樂菌素、替米考星、氯霉素、氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)品均為天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心監(jiān)制
　　乙腈、正己烷均為優(yōu)級(jí)純
　　其它試劑均為分析純
　　實(shí)驗(yàn)用水均為二次蒸餾水
　　新鮮牛肉與雞肉均為超市所購(gòu)
　　2 色譜條件
　　C18反相色譜柱
　　柱溫25℃，流速1mL/min，進(jìn)樣量25uL，梯度洗脫條件A相為甲醇，B相為0.2mol/L磷酸二氫鈉含10%（體積比）甲醇，調(diào)節(jié)pH為3.0，梯度洗脫程序：0-2min10%A，2-8min 10%-40%A，8-9min40%-10%A，檢測(cè)波長(zhǎng)入為275nm
　　3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制及標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
　　分別準(zhǔn)確稱取各標(biāo)準(zhǔn)品0.01g（至0.001g），用甲醇分別溶解并定容至100mL，配制成100mg/L標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于一4℃冰箱中冷藏，測(cè)定時(shí)將各標(biāo)準(zhǔn)溶液混合后稀釋成0.1、0.2、0.5、1.0、5.0、10.0、15.0、20.0mg/L的溶液。分別以泰樂菌素、替米考星、氯霉素、氟苯尼考峰面積為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程及相關(guān)系數(shù)（r）。
　　4 樣品處理
　　將新鮮牛肉及雞肉分別勻漿后，于-18℃冰箱中保存。測(cè)定時(shí)，將勻漿冷凍保存的牛肉與雞肉樣品于室溫下自然解凍。分別準(zhǔn)確稱取20.0g樣品置于50mL具塞錐形瓶中，加入20mL乙腈，超聲10min，轉(zhuǎn)移至離心管，以5000r/min離心10min，收集上清液，離心沉淀物用上述方法重復(fù)提取2次，合并上清液。向得到的清夜中加入30mL正己烷，用力振蕩5min，靜置分層，棄去上層正己烷層。然后將溶液于40℃減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至約2mL，氮?dú)獯蹈珊蠹尤?mL甲醇一磷酸鹽混合液超聲溶解抗生素，定容至10mL。
　　5樣品凈化
　　將HLB固相萃取小柱用5mL甲醇、5mL去離子水活化后，將4得到的樣品處理液上固相萃取柱（柱流速保持1滴/s），用10mL蒸餾水、10mL5%甲醇水溶液淋洗固相萃取柱，再用10mL甲醇洗脫，將洗脫液用氮?dú)獯蹈珊?，加入流?dòng)相超聲定容至5mL，zui后，經(jīng)0.22um濾膜過濾后進(jìn)樣。
　　6方法的準(zhǔn)確度、精密度、線性范圍、回收率
　　對(duì)于牛肉樣品分別添加0.1、0.5、1.0mg/kg 3個(gè)水平的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照4與5樣品處理及凈化方法，每個(gè)水平平行測(cè)定4次，進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)，并且以3倍信噪比分別計(jì)算泰樂菌素、替米考星、氯霉素、氟苯尼考在牛肉樣品中的檢出限，在測(cè)定條件下4種藥物在0.1—20mg/L范圍內(nèi)均呈線性，線性方程與相關(guān)系數(shù)、平均回收率、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差見表1 

　　7 實(shí)際樣品檢測(cè)
　　本實(shí)驗(yàn)分別對(duì)10份牛肉樣品和10份雞肉樣品中泰樂菌素、替米考星、氯霉素、氟苯尼考進(jìn)行檢測(cè)，沒有發(fā)現(xiàn)牛肉樣品中含有以上抗生素，但是在4份雞肉樣品中都不同程度檢測(cè)到了泰樂菌素，zui高為200ug/kg，zui低為80ug/kg，平均含量為120ug/kg，高于我國(guó)動(dòng)物性食品中獸藥zui高殘留*（100ug/kg）7 實(shí)際樣品檢測(cè)
　　本實(shí)驗(yàn)分別對(duì)10份牛肉樣品和10份雞肉樣品中泰樂菌素、替米考星、氯霉素、氟苯尼考進(jìn)行檢測(cè)，沒有發(fā)現(xiàn)牛肉樣品中含有以上抗生素，但是在4份雞肉樣品中都不同程度檢測(cè)到了泰樂菌素，zui高為200ug/kg，zui低為80ug/kg，平均含量為120ug/kg，高于我國(guó)動(dòng)物性食品中獸藥zui高殘留*（100ug/kg）
四、結(jié)論
　　 我國(guó)動(dòng)物性食品中獸藥zui高殘留*規(guī)定泰樂菌素、替米考星、氯霉素、氟苯尼考在肉品中的zui高殘留量（MRL）分別為100、75、1.5、200ug/kg，本實(shí)驗(yàn)所測(cè)泰樂菌素、替米考星、氟苯尼考的檢出限分別為20、32、16ug/kg均在zui高殘留*以下，符合殘留檢測(cè)分析要求。由于氯霉素藥物特殊性，歐盟對(duì)氯霉素的檢出限要求為0.1ug/kg，美國(guó)FDA對(duì)氯霉素的檢出限要求為0.3ug/kg，按照本實(shí)驗(yàn)方法，氯霉素檢出限為19ug/kg，還未達(dá)到上的要求，這是因?yàn)樘崛》椒ê退脵z測(cè)器所致。今后應(yīng)該發(fā)展更加靈敏的方法以提高氯霉素。本實(shí)驗(yàn)方法的平均回收率較高（75%-87%），而且步驟簡(jiǎn)單、操作容易、重現(xiàn)性較好相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.35%-5.41%，表明方法穩(wěn)定可靠。
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