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　　首先，我們要了解等度和梯度的現(xiàn)象不一樣，所以下面的討論要分兩個(gè)部分進(jìn)行展開。

　　一、等度色譜

　　首先讓我們定義一下問題中的空白，如果你進(jìn)的是流動(dòng)相，那么就不應(yīng)該有峰，但是如果是其他的，例如你通常溶解樣品的溶液，那么有峰出現(xiàn)是正常的。除流動(dòng)相外的任何溶液都會(huì)干擾流動(dòng)相和固定相之間的平衡，從而導(dǎo)致峰出現(xiàn)。

　　回收流動(dòng)相

　　如果流動(dòng)相中的組分有輕微保留，就會(huì)表現(xiàn)為保留峰，這些峰可能是正峰或倒峰。如果你回收了流動(dòng)相并且使用了一段時(shí)間，你就會(huì)發(fā)現(xiàn)在你平常進(jìn)樣時(shí)樣品峰的位置會(huì)有一個(gè)倒峰。前面進(jìn)的樣品聚集在回收溶劑里，固定相表面也部分覆蓋著分析物。當(dāng)你進(jìn)新鮮配置的流動(dòng)相或者其他的溶劑時(shí)，樣品組分就會(huì)濃度不足(相對(duì)于含樣品的溶液來說)，這個(gè)濃度不足沿柱子流動(dòng)，速度與其相應(yīng)的峰一樣，這樣與通常色譜相反的圖譜就出現(xiàn)了。這個(gè)現(xiàn)象叫做空穴色譜，這些峰叫做空穴峰。這是不回收流動(dòng)相的其中一個(gè)原因。

　　過載和沉淀

　　液相色譜儀如果進(jìn)的樣是和流動(dòng)相一樣，就要跳出柱子和流動(dòng)相之外看看。例如可能是上一次過載引起的?？纯醋詣?dòng)進(jìn)樣器的洗針能否工作，手動(dòng)的話確認(rèn)注射器是否*清洗干凈，針筒外面也要洗。

　　會(huì)不會(huì)是前面的樣品組分沉淀或吸附在進(jìn)樣器上?如果是這樣，那么每次進(jìn)樣后這個(gè)峰就會(huì)減小。確保樣品所有組分都能溶于流動(dòng)相，的解決辦法是用流動(dòng)相溶解樣品。

　　流路產(chǎn)生

　　液相色譜儀每一次進(jìn)樣都伴隨著一次壓力脈動(dòng)。如果在流路中有死角，例如壓力儀的T型接頭等，壓力脈動(dòng)會(huì)把死角的溶液帶到流路中來，呈現(xiàn)為一個(gè)峰。通常這種峰比色譜圖中的峰要寬。檢查一下流路，盡量不留死角。

　　二、梯度色譜

　　上面的原因適用與等度色譜，如果你是運(yùn)行梯度，會(huì)有一些其他原因?qū)е驴瞻兹芤褐谐龇濉?/p>

　　溶液雜質(zhì)

　　液相色譜儀流動(dòng)相中的微小成分和雜質(zhì)會(huì)在柱子的初始比例平衡過程中富集在柱子上，當(dāng)梯度中流動(dòng)相洗脫能力變大時(shí)，這些東西會(huì)象樣品一樣從柱子上脫離。如果你的流動(dòng)相有很多雜質(zhì)，出來的圖譜就會(huì)有很多的峰。問題的主要來源是水。水有很多途徑帶來雜質(zhì)，包括凈化系統(tǒng)本身，存儲(chǔ)容器和細(xì)菌生長(zhǎng)等等。水凈化系統(tǒng)要經(jīng)常用反相梯度的空白基線來監(jiān)視。另外，推薦購(gòu)買HPLC級(jí)的水。

　　即使使用高質(zhì)量的溶液和溶劑，還是可能會(huì)檢測(cè)到由溶劑本身導(dǎo)致的峰。這取決于你用的檢測(cè)器，如果你用的是紫外檢測(cè)器，就取決于檢測(cè)波長(zhǎng)以及檢測(cè)器對(duì)流動(dòng)相折射率改變的敏感性。使用高質(zhì)量的溶劑，梯度背景更象一個(gè)圓包而不是一堆峰。

　　含蛋白質(zhì)的樣品

　　如果用反相色譜分析含蛋白質(zhì)的樣品，也有可能在空白中發(fā)現(xiàn)峰，它是由之前的進(jìn)樣帶來的。峰面積會(huì)在接下來的空白梯度中迅速減小。除非沒有進(jìn)樣，否則這種現(xiàn)象表明樣品在進(jìn)樣器中過載了。進(jìn)樣器甚至可能會(huì)被弄掉線。這是由于有些蛋白質(zhì)在開始的梯度中不*溶解造成的。例如在特定條件下只有2/3的卵蛋白素溶解在開始的梯度中，在接下來的每一次梯度中都有大概相同數(shù)量的卵蛋白素溶解到流動(dòng)相中，經(jīng)過幾次運(yùn)行之后卵蛋白素的含量就變的微乎其微了，這種現(xiàn)象就是很典型的由蛋白質(zhì)造成的。在我的印象中，還沒有發(fā)現(xiàn)過小分子化合物有這種現(xiàn)象。

　　綜上所述，發(fā)現(xiàn)問題后要善于總結(jié)原因，找到原因后對(duì)癥下藥，才能快速準(zhǔn)確解決問題。