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一、動(dòng)物原代細(xì)胞

動(dòng)物原代細(xì)胞是通過(guò)機(jī)械或酶的方法，或兩者的結(jié)合，直接從動(dòng)物組織中分離和純化出來(lái)的。它們通常攜帶來(lái)自特定組織(如腦、肝、胰腺、肺、心肌、腎、乳腺、前列腺、睪丸、甲狀腺、胃、小腸、結(jié)腸、骨骼肌、脂肪組織和皮膚)的原始動(dòng)物細(xì)胞的所有特征。動(dòng)物原代細(xì)胞可以從健康或患病的動(dòng)物身上提取，在組織移除之前不需要進(jìn)行其他實(shí)驗(yàn)。

一旦目標(biāo)組織在無(wú)菌條件下被消化和解剖，將被過(guò)濾和離心進(jìn)一步純化，重懸的原代細(xì)胞將被計(jì)數(shù)并用冷凍保存培養(yǎng)基冷凍保存或用其有利的天然(由天然存在的生物液體組成，如血漿，組織提取物等)或人工培養(yǎng)基(由必需氨基酸，維生素，鹽，血清，碳水化合物，輔助因子等)在孵育前為其正常生長(zhǎng)所需，培養(yǎng)基將在幾小時(shí)后根據(jù)特定細(xì)胞類型進(jìn)行更換。例如，圖1顯示了從小鼠肝臟中分離和純化原代肝細(xì)胞的過(guò)程。在這種條件下純化的動(dòng)物原代細(xì)胞被命名為傳代0 (P0)，它們既可以在冷凍瓶中作為庫(kù)存短時(shí)間冷凍保存，也可以直接在培養(yǎng)瓶中交付給我們的客戶。

到目前為止，AcceGen提供了900多種不同的動(dòng)物原代細(xì)胞用于研究，提供了各種各樣的原代細(xì)胞，包括小鼠原代細(xì)胞、大鼠原代細(xì)胞、牛原代細(xì)胞、猴原代細(xì)胞、兔原代細(xì)胞、豬原代細(xì)胞和其他原代細(xì)胞，包括來(lái)自綿羊、鳥類、雞、豚鼠、火雞、馬、山羊和貓的原代細(xì)胞。此外，我們的動(dòng)物原代細(xì)胞也涵蓋了許多不同的菌株。例如，AcceGen提供的小鼠原代細(xì)胞包括但不限于CD1、ICR、BALB/c、B129、CF1、C57BL/6、B6129SF2/J、C57BLKS/J和DBA/2菌株。

二、貼壁vs.懸浮

動(dòng)物原代細(xì)胞既可以作為貼壁培養(yǎng)物生長(zhǎng)，也可以保持懸浮狀態(tài)。貼壁細(xì)胞依賴于錨定，并以單層形式增殖，需要附著在固體或半固體底物上才能增殖。貼壁動(dòng)物原代細(xì)胞在細(xì)胞外基質(zhì)的幫助下粘附在培養(yǎng)容器上，這些細(xì)胞通常來(lái)自于不動(dòng)的組織，存在于結(jié)締組織網(wǎng)絡(luò)中，例如上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞。由于這種培養(yǎng)血管的底部覆蓋著一層單細(xì)胞厚度的連續(xù)細(xì)胞，因此它們也被稱為單層培養(yǎng)。大多數(shù)動(dòng)物原代細(xì)胞以貼壁培養(yǎng)的方式生長(zhǎng)。由于它們是單層生長(zhǎng)的，因此在培養(yǎng)維護(hù)時(shí)可以方便地將其直接轉(zhuǎn)移到蓋玻片上，并在后期的實(shí)驗(yàn)中在顯微鏡下進(jìn)行檢查。

懸浮細(xì)胞，也稱為非貼壁或錨定獨(dú)立細(xì)胞，不附著在培養(yǎng)容器表面。相反，它們?cè)谂囵B(yǎng)液中漂浮生長(zhǎng)。懸浮細(xì)胞可以維持在沒(méi)有經(jīng)過(guò)組織培養(yǎng)處理的培養(yǎng)瓶中。然而，為了保持足夠的氣體交換，培養(yǎng)基可能需要攪拌，這通常是用磁力攪拌器或旋轉(zhuǎn)旋轉(zhuǎn)燒瓶來(lái)實(shí)現(xiàn)的。此外，與貼壁動(dòng)物原代細(xì)胞相比，懸浮動(dòng)物原代細(xì)胞更容易傳代，生長(zhǎng)速度更快，它們也不需要與胰蛋白酶或膠原酶解離，盡管每日細(xì)胞計(jì)數(shù)和活力測(cè)定可能需要遵循它們的生長(zhǎng)模式。造血干細(xì)胞(來(lái)源于血液、骨髓或脾臟)和神經(jīng)干細(xì)胞是懸浮原代細(xì)胞的兩個(gè)例子。

三、動(dòng)物原代細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)

雖然動(dòng)物原代細(xì)胞的壽命有限，但它們?yōu)檠芯咳藛T提供了一些du特的好處。首先，由于動(dòng)物原代細(xì)胞無(wú)需實(shí)驗(yàn)室修飾即可密切反映體內(nèi)條件，因此它們是在體內(nèi)研究細(xì)胞生物學(xué)功能的替代方法。作為人類系統(tǒng)的模型，動(dòng)物原代細(xì)胞可用于檢查廣泛的疾病機(jī)制，并在將結(jié)果應(yīng)用于人類之前評(píng)估新的治療方法。動(dòng)物原代細(xì)胞培養(yǎng)的理化和生理?xiàng)l件都是可調(diào)節(jié)的，如培養(yǎng)基的pH、溫度、O2/CO2濃度、滲透壓等。這樣的研究為了解廣泛的人類疾病提供了關(guān)鍵的見(jiàn)解。另一方面，對(duì)來(lái)自不同動(dòng)物的分離細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)也有助于加深對(duì)不同細(xì)胞的不同功能和運(yùn)作機(jī)制的理解。不同物種間細(xì)胞代謝的研究和細(xì)胞生理生化的研究就是很好的例子。此外，動(dòng)物原代細(xì)胞也可以作為細(xì)胞毒性測(cè)定的重要模型。例如，可以研究各種藥物或化合物對(duì)特定細(xì)胞類型(如神經(jīng)元細(xì)胞或肝細(xì)胞)的作用。來(lái)自神經(jīng)、肝臟、胰腺、肺、心臟、腎臟、胃、腸、骨骼、脂肪、皮膚和眼部系統(tǒng)的動(dòng)物原代細(xì)胞都是生物醫(yī)學(xué)研究和藥物發(fā)現(xiàn)中常用的模型。此外，通過(guò)使用動(dòng)物原代細(xì)胞，可以避免在實(shí)驗(yàn)中使用動(dòng)物的倫理、道德和法律問(wèn)題。 

為了進(jìn)一步闡述動(dòng)物原代細(xì)胞的du特優(yōu)勢(shì)，表1特地總結(jié)了原代細(xì)胞培養(yǎng)和連續(xù)細(xì)胞系之間的不同特征。

與原代細(xì)胞培養(yǎng)相比，連續(xù)細(xì)胞系具有無(wú)限數(shù)量的細(xì)胞代。它們?cè)谂囵B(yǎng)物中生長(zhǎng)得更快，細(xì)胞密度更高。此外，由于連續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)具有不朽性和致瘤性，它們沒(méi)有接觸抑制，失去了增殖的限制。它們通常以多層或懸浮的方式生長(zhǎng)，具有在大規(guī)模生物反應(yīng)器中培養(yǎng)的潛力。然而，與動(dòng)物原代細(xì)胞相比，連續(xù)細(xì)胞系的主要缺點(diǎn)是染色體不穩(wěn)定、表型變異以及與供體組織相關(guān)的特異性和特征性標(biāo)記物的變化[4]。因此，連續(xù)細(xì)胞系不能代表動(dòng)物原代細(xì)胞的體內(nèi)狀態(tài)。

四、結(jié)論

直接從動(dòng)物組織中分離的動(dòng)物原代細(xì)胞保持了許多重要的標(biāo)志物和體內(nèi)功能。然而，它們中的大多數(shù)具有有限的壽命和有限的擴(kuò)增能力。因此，始終使用低傳代的動(dòng)物原代細(xì)胞至關(guān)重要。盡管一些動(dòng)物原代細(xì)胞類型，比如神經(jīng)元，甚至不具備分裂能力。

值得一提的是，動(dòng)物原代細(xì)胞從來(lái)都不是100%純的，所以使用的細(xì)胞傳代越高，被污染的細(xì)胞生長(zhǎng)超過(guò)目標(biāo)細(xì)胞的風(fēng)險(xiǎn)就越大。同時(shí)，即使對(duì)于一些可以比其他細(xì)胞傳代次數(shù)更多的原代細(xì)胞類型，每次傳代總是會(huì)發(fā)生表型和遺傳變化。這些遺傳變化隨后會(huì)導(dǎo)致表觀遺傳變化。因此，我們強(qiáng)烈建議客戶盡可能早地使用動(dòng)物原代細(xì)胞傳代，以防止遺傳漂變。

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