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使用倒置相差顯微鏡時需要注意哪些常見問題？
閱讀：573 發(fā)布時間：2023-7-3
倒置相差顯微鏡利用相差干涉技術，通過光的相位差來增強對透明樣本的成像能力。它使用特殊的相差物鏡和調制器，在樣本和底部的背景之間引入補償光束，以突出樣本內部的細節(jié)和結構。
使用倒置相差顯微鏡時，需要注意以下常見問題：
1、樣本準備：在使用之前，確保樣本已經適當制備。樣本應該是透明的，如細胞培養(yǎng)物、組織切片或液體懸浮物。對于固體樣本，可以使用切片機將其切割成適當?shù)暮穸?。對于活細胞觀察，可能需要使用培養(yǎng)皿和適當?shù)呐囵B(yǎng)基來維持細胞的生存環(huán)境。
2、有效對焦：工作原理是利用鏡頭底部的物鏡來放大和對焦樣品。確保調節(jié)聚焦旋鈕，使得樣本圖像清晰可見。根據(jù)樣本的厚度和形態(tài)，可能需要逐層調整聚焦以獲得最佳對焦效果。
3、液面平整：由于它是從樣品上方照射光線，因此必須確保液體樣品表面的平整性。如果液面不平整，會導致光線折射失真，影響成像質量?？梢酝ㄟ^調節(jié)培養(yǎng)皿或加入一些油或介質來平整液體表面。
4、光路調整：光路中有多個光學元件，如物鏡、凸透鏡和光源。確保這些元件正確安裝并對齊。檢查光源是否正常工作，并根據(jù)需要調整光源強度和照明方式。
5、鏡頭清潔：鏡頭是核心組件，應保持清潔。使用干凈的鏡頭紙輕輕擦拭鏡頭表面，以去除灰塵或污垢。避免使用過度力量或化學溶劑來清潔鏡頭，以防損壞鍍膜或引起其他問題。
6、限制振動和干擾：對振動和干擾非常敏感，可能導致圖像抖動或模糊。因此，在操作顯微鏡時要盡量避免觸摸或震動儀器。同時，將顯微鏡放置在穩(wěn)定的表面上，遠離振動源，如空調、電風扇等。
7、調節(jié)曝光時間：曝光時間是指相機傳感器接收光線的時間。根據(jù)樣本的亮度和對比度，可能需要調整曝光時間以獲得最佳圖像質量。過長或過短的曝光時間都會導致圖像細節(jié)丟失或過曝。
8、圖像記錄：通常配備數(shù)字相機或攝像機來記錄圖像。確保相機設置正確，并根據(jù)需要進行圖像參數(shù)的調整。同時，選擇適當?shù)膱D像文件格式和分辨率，以便后續(xù)分析和處理。