分子生物學(xué)（基因工程）的實驗中，經(jīng)常要做細(xì)胞質(zhì)粒DNA的提取和檢測工作，以便獲得運載基因的載體DNA；或用于實行電泳檢測分析，了解樣品是否含有質(zhì)粒DNA（包括重組質(zhì)粒DNA），判斷其分子量大小，區(qū)別不同質(zhì)粒等等。因此質(zhì)粒DNA的提取是基因工程實驗中zui常用的手段之一。
質(zhì)粒是一種染色體外的穩(wěn)定遺傳銀子，大小從1kb到200kb不等，大多數(shù)來自細(xì)菌的質(zhì)粒是雙鏈、共價閉合環(huán)狀的分子，并以超螺旋形式存在于宿主的細(xì)胞質(zhì)中。它是細(xì)菌內(nèi)的共生型遺傳因子，主要發(fā)現(xiàn)于細(xì)菌、放線菌和真菌細(xì)胞中，質(zhì)粒具有自主復(fù)制和轉(zhuǎn)錄能力，能在子代細(xì)胞中保持恒定的拷貝數(shù)，并表達(dá)所攜帶的遺傳信息。
質(zhì)粒的分離是利用質(zhì)粒DNA和染色體DNA在變性與復(fù)性中的差異來達(dá)到的目的。當(dāng)菌體在NaOH和SDS溶液中裂解時，蛋白質(zhì)與DNA發(fā)生變性，由于染色體DNA與質(zhì)粒DNA拓?fù)錁?gòu)型不同，染色體DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)解開，而共價閉合質(zhì)粒DNA的氫鍵雖被斷裂，但兩條互補(bǔ)鏈彼此相互盤繞仍會緊密地結(jié)合在儀器。當(dāng)加入中和液后，溶液pH恢復(fù)至中性，在高鹽濃度的情況下，染色體DNA之間交聯(lián)形成不溶性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)并與蛋白質(zhì)SDS復(fù)合物等形成沉淀；不同的是質(zhì)粒DNA復(fù)性迅速而準(zhǔn)確，保持可溶狀態(tài)而留在上清中。這樣，通過離心可沉淀大部分細(xì)胞碎片、染色體DNA、RNA及蛋白質(zhì)。除去沉淀后上清中的質(zhì)粒可用酚氯仿抽提進(jìn)一步純化質(zhì)粒DNA。
前面提取質(zhì)粒DNA的方法就是實驗室常用的堿裂解法，該法的操作過程如下：首先講含有質(zhì)粒的細(xì)菌接種到培養(yǎng)基，經(jīng)過大約12小時的恒溫?fù)u陪后棄去上清液，加入中和液后用漩渦混勻器將溶液充分混勻，然后加入堿液進(jìn)行沉淀，這就是變性與復(fù)性，zui后的操作就是實驗室常用的沉淀的分離、純化。分離、純化DNA首先取上清液，加入分離液后采用漩渦混勻器混勻溶液，離心取上清液，加入無水乙醇后混勻，離心后棄上清液，干燥DNA即可。
這個實驗中常用到漩渦混勻器進(jìn)行溶液混勻，意大利VELP公司推出多種型號的漩渦混勻器可滿足每一個實驗室的需要和安全標(biāo)準(zhǔn)。特別是紅外漩渦混勻器，這是VELP公司的，該漩渦混勻器一旦檢測到試管即自動開始震動混勻，不需要施加任何外力，震動速度可調(diào)，時間可設(shè)，漩渦混勻器穩(wěn)定性高，非常適合細(xì)胞質(zhì)粒提取實驗。
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