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食用菌母種和原種菌種制作詳細(xì)的操作
現(xiàn)在逐漸隨著食用菌產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展，各行業(yè)的菌種需要量就慢慢隨之增加，而目前我國菌種生產(chǎn)單位明顯是有點(diǎn)少了，許多菇農(nóng)不得不向外引種。但不說長途購運(yùn)菌種不僅花費(fèi)大，成本高而且菌種如果因破瓶而易引起雜菌污染，從而也會嚴(yán)重影響栽培食用菌的經(jīng)濟(jì)效益。菇農(nóng)若能掌握菌種生產(chǎn)程序和制種技術(shù)，實(shí)行自行制種，逐步發(fā)展成制種專業(yè)戶，也是一項(xiàng)很好的致富門路。菌種生產(chǎn)程序，通常分為母種、原種和栽培種3個層次，也就是通常所說的一級、二級、三級菌種。其中母種的分離選育技術(shù)性強(qiáng)，要求精化；而原種和栽培種的制作則比較簡單。下面就由中藥標(biāo)準(zhǔn)對照品研究中心給各位介紹各級菌種的制作技術(shù)。
一、母種的分離選育母種主要采用人工選擇、誘變育種、雜交育種和原生質(zhì)融合等手段獲得。作為一般制種專業(yè)戶，可以采用人工選擇方式分離培育母種，具體步驟與操作方法如下。
1、采集種源從野生成人工栽培群體中，選擇有代表性的優(yōu)良菇體作為種源。種菇的標(biāo)準(zhǔn)是：八成熟，朵形圓正、肉質(zhì)肥厚，無病蟲害。采集1--2朵符合上述標(biāo)準(zhǔn)的種菇編上號碼，作為分離母種的材料。從栽培室采集的應(yīng)標(biāo)有原菌株代號。
2、培養(yǎng)基配制瓊脂培養(yǎng)基又叫PDA培養(yǎng)基，常用配方為：馬鈴薯200--250克，瓊脂15--20克，葡萄糖20--25克，清水1000毫升。也可以加硫酸鎂1--1．5克，維生素B1微量，磷酸二氫鉀2--3克。先將馬鈴薯洗凈去皮，切成薄片，置于鋁鍋內(nèi)加水煮沸30分鐘，撈起后用4層紗布過濾，取汁。然后將瓊脂加入汁內(nèi)，邊加熱邊攪拌，讓瓊脂充分溶化；再將葡萄糖等加入，稍煮幾分鐘后，同樣用4層紗布過濾，取其汁液。將汁液趁熱裝入玻璃試管內(nèi)。裝至管長的1／5，管口用棉花塞緊，或?qū)⒅貉b入玻璃三角瓶內(nèi)，裝量20毫升。然后置于高壓鍋內(nèi)，在98--108千帕／厘米的壓力下滅菌30分鐘左右。滅菌后及時(shí)取出，趁熱將試管斜排于桌上，冷卻后即成為固體斜面培養(yǎng)基。
3、母種分離方法有孢子彈射、組織分離和基內(nèi)分離3種方法。①孢子彈射法。將種菇表面消毒，吸干水分后，將菇體懸掛于裝有瓊脂培養(yǎng)基的三角瓶內(nèi)，讓菇體內(nèi)的袍子自然散落在培養(yǎng)基上萌發(fā)菌絲。也可以剪取一小決菇體，貼附在試管斜面培養(yǎng)基表面，讓孢子散落在培養(yǎng)基上萌發(fā)菌絲，即能獲得母種；③組織分離法。將消毒過的種菇，在接種箱內(nèi)用手從菇柄處對半解開，或用刀片切開，使菇體形成對開。在菌蓋和菌柄交界處或菌褶處，用接種刀切取一小塊菇體，然后縱切成5毫米x10毫米的小薄片，用接種針挑取一塊薄片，接入斜面培養(yǎng)基的中央，每支試管接種一小決薄片，待其萌發(fā)菌絲，即可得到母種；(3)基內(nèi)分離法。選擇已長菇的木段，削去樹皮及表層木質(zhì)部，用70％的酒精消毒后，鋸成1厘米厚的薄片，放入0．1％的 HgCl2水中消毒1--2分鐘，再用滅菌水洗去殘液。然后再將小薄片劈成0．5--1厘米寬的小條，接入斜面培養(yǎng)基中央，待長出菌絲后即得母種。也可以在已長菇的菌袋中，經(jīng)消毒處理后，用接種針鉤取袋內(nèi)色澤純、長勢旺的菌絲體，接種在試管斜面培養(yǎng)基中央，待萌發(fā)菌絲后，同樣獲得菌種。
4、適溫培養(yǎng)通過上述不同方式將菌種分離接種于試管后，要及時(shí)將試管移入已消毒的培養(yǎng)箱或培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)，溫度控制在25℃左右，使分離獲得的孢子或菌絲在適溫下發(fā)育。
一般孢子彈射3--4天后孢子萌發(fā)成菌落，10天后菌絲長滿管；組織分離接種后2--3天，菌絲即萌發(fā)，并在培養(yǎng)基上蔓延生長；菇木分離接種后，7天菌絲即恢復(fù)生長。
5、選育提純通過上述方法得到的菌絲，不一定都是的，還需要選育提純。因此，在菌絲萌發(fā)后，要認(rèn)真觀察，挑選色澤純、健壯、長勢正常、無間斷的菌絲，在接種箱內(nèi)連同培養(yǎng)基鉤取菌絲，接入另備的試管培養(yǎng)基上。在生化培養(yǎng)箱23--25℃的恒溫條件下，培養(yǎng)7--10天，待菌絲長滿管后，再進(jìn)行觀察，從中擇優(yōu)取用，即為“母代”母種。
6、轉(zhuǎn)管擴(kuò)接母代母種可以轉(zhuǎn)管擴(kuò)接成“子代”母種。采用同樣的斜面培養(yǎng)基，每支可擴(kuò)接30--50支子代母種。生產(chǎn)上供應(yīng)的多為子代母種。它可以再次轉(zhuǎn)管擴(kuò)接。一般每支可擴(kuò)接成20--25支子代母種，但轉(zhuǎn)管次數(shù)不得超過5次。