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技術(shù)服務(wù)

細(xì)胞生物學(xué)

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CCK8/細(xì)胞增殖檢測在37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育一定時間(依不同的細(xì)胞種類而定，一般是1 - 4 h)。酶標(biāo)儀測定450 nm處的吸光值，以細(xì)胞數(shù)為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可測定未知樣品的細(xì)胞數(shù)量。使用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提是試驗條件與此一致。

詳細(xì)介紹

CCK8/細(xì)胞增殖檢測

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

收集培養(yǎng)可傳代的細(xì)胞，確定細(xì)胞密度，然后接種細(xì)胞；
按比例(如1:2的比例)依次用培養(yǎng)基等比梯度稀釋細(xì)胞，一般做5 - 7個細(xì)胞數(shù)梯度，每組3 - 6個重復(fù)，接種至96孔板中，每孔加入100 ul 的細(xì)胞懸液；
每孔加入10 ul CCK-8 Solution，輕輕混勻，在37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育一定時間(依不同的細(xì)胞種類而定，一般是1 - 4 h)。酶標(biāo)儀測定450 nm處的吸光值，以細(xì)胞數(shù)為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可測定未知樣品的細(xì)胞數(shù)量。使用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提是試驗條件與此一致。

細(xì)胞活性檢測

接種細(xì)胞于96孔板中(100 ul/孔，避免氣泡產(chǎn)生)預(yù)培養(yǎng)24 h，同時設(shè)置空白組和對照組；
向每孔加入10 ul CCK-8 Solution(建議沿細(xì)胞板壁加入，輕晃，避免氣泡產(chǎn)生)；
在細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育一定時間；
酶標(biāo)儀測定450 nm處的吸光值。

細(xì)胞增殖—毒性檢測

接種細(xì)胞于96孔板中(100 ul/孔，避免氣泡產(chǎn)生)預(yù)培養(yǎng)24 h，同時設(shè)置空白組和對照組；
每孔分別加入不同濃度的待測藥物，在培養(yǎng)箱中孵育一段時間(依據(jù)待測藥物而定)；
向每孔加入10 ul CCK-8 Solution(建議沿細(xì)胞板壁加入，輕晃，避免氣泡產(chǎn)生)，培養(yǎng)箱中孵育一定時間；
酶標(biāo)儀測定450 nm處的吸光值。

換算公式

細(xì)胞存活百分比=[(A-C)/(B-C)] x100

抑制百分比=[(B-A)/(B-C)] x 100
A:實驗組吸光值(為含有培養(yǎng)基、細(xì)胞、待測藥物和CCK-8 Solution的吸光值)
B:對照組吸光值(為含有培養(yǎng)基、細(xì)胞、CCK-8 Solution的吸光值)
C:空白組吸光值(為含有培養(yǎng)基、CCK-8 Solution的吸光值)客戶提供