煙草中含有多種多酚類(lèi)化合物，為煙草產(chǎn)生香味的主要 前體物，其種類(lèi)和含量隨物種和地域分布存在密切關(guān)系， 其中綠原酸和蘆丁占有主要部分 [1]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明 綠原酸、蘆丁等多酚類(lèi)化合物具有抗氧化作用，可降低 血管脆性，增加細(xì)胞膜滲透性能，提高細(xì)胞排泄生理體 液等功能，已廣泛用于醫(yī)藥、食品等行業(yè) [2,3]。煙草中多 酚類(lèi)化合物的檢測(cè)方法有分光光度法、氣相色譜法、液 相色譜法等。其中分光光度法專屬性差且只能測(cè)定其近 似總量；氣相色譜法則需要將樣品進(jìn)行衍生后才能分析； 傳統(tǒng)液相色譜法需要用有機(jī)溶劑進(jìn)行脫脂處理，樣品處 理較繁瑣 [4]
本研究對(duì)煙草中 2 種多酚化合物提取方法進(jìn) 行了優(yōu)化設(shè)計(jì)，并采用反相液相色譜方法測(cè)定煙草中綠 原酸和蘆丁含量。其分析結(jié)果與發(fā)表相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的方法 [5] 相比，該方法靈敏度高、檢出限低、峰形對(duì)稱、分析時(shí) 間短。
儀器配置 Thermo Ultimate 3000 系統(tǒng)： 泵：LPG-3400 自動(dòng)進(jìn)樣器：WPS-3000 柱溫箱：TCC-3000 檢測(cè)器：DAD-3000 色譜軟件：Chromeleon 6.8
測(cè)試條件 色譜柱：Acclaim 120® C18, 4.6×150mm, 5μm, PN:059148， SN:003887 流動(dòng)相：A：0.1% 磷酸溶液，B：甲醇 梯度程序：0~10min: 20% → 30%;10~25min:30% → 90%B; 25~27min:90%B;27~28min:90% → 20%B;28~32min: 20%B
進(jìn)樣量：10µl 柱溫：35℃ 檢測(cè)波長(zhǎng)：325nm 樣品處理 精密稱取 0.5g 樣品粉末置于 50ml 量瓶中，加入 55% 甲醇 20ml，超聲提取 30min，放置室溫，過(guò)濾，取 2ml 濾液用 20% 甲醇稀釋至 10ml，搖勻備用。
結(jié)果與討論
提取條件篩選 通過(guò)查閱文獻(xiàn)[6~8]，對(duì)提取溶劑濃度和用量進(jìn)行了考察 (表1) 表 1. 提取實(shí)驗(yàn)方案 序號(hào) 甲醇濃度 (%) 體積 (ml) 1 30 10 2 30 20 3 30 30 4 50 10 5 50 20 6 50 30 7 70 10 8 70 20 9 70 30 結(jié)果顯示，當(dāng)甲醇濃度為 50% 時(shí)，兩種成分的含量達(dá)到值，增加甲醇濃度時(shí)，綠原酸含量不再增加，蘆丁 含量會(huì)有降低趨勢(shì)。當(dāng)溶劑體積為 20ml 時(shí)，兩種成分含 量達(dá)到值，再增大溶劑用量，二者含量不再增加。 通過(guò)數(shù)據(jù)分析 ( 見(jiàn)圖 1)，決定采用 55% 甲醇 20ml 程度提取煙草中的綠原酸和蘆丁兩種成分。
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