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目的：采用液相色譜與三重四極桿質譜聯用技術，為用于臨床研究血漿中雌二醇和睪酮的定量分析，開發(fā)靈敏的 LC-MS/MS 分析方法。

簡介：對用于臨床研究血漿樣品中雌二醇和睪酮的定量分析要求具有靈敏的分析方法。液相色譜與串聯質譜聯用（LC-MS/MS）技術因其是一種高靈敏度和寬選擇性的分析技術，現已被廣泛用于對復雜基質樣品的雌二醇和睪酮的分析中，如人體血清或血漿。

實驗：樣品制備為制備樣品，先將 10 µL 的加標溶液（終濃度范圍：0.5-10 ng/mL）和 20 µL 的內標化合物（2 ng/mL 睪酮 -13C3 和 20 ng/mL 雌二醇 -d5）加入到 400 µL 的血漿中。然后再加入 2 mL 的 MTBE，對樣品溶液進行渦旋。在進行液 – 液萃?。↙LE）之后 對 MTBE 層進行氮吹，氮吹后加入 200 µL 50：50 甲醇 / 水重新建立分層。取 10 µL 進樣進行 LCMS/MS 分析，每個樣重復進樣三次。

液相色譜分析方法：采用 Thermo ScientificTM VanquishTM Flex HPLC 系統并配備 Thermo ScientificTM AccucoreTM aQ C18 極性 LC 色譜柱（100×2.1 mm，2.5 µm 粒徑，P/N 17326-102130）進行色譜分離。流動相 A 和 B 分別為 0.5 mM 的氟化銨水溶液和純甲醇溶液，溶劑分別為 Fisher ChemicalTM OptimaTM 級水和純甲醇。柱溫箱溫度設為 40 ° C，總運行時間為 9 分鐘（表 1）。

質譜分析方法：質譜方法采用配置加熱式電噴霧離子源（HESI）的 Thermo ScientificTM TSQ AltisTM 三重四極桿質譜儀進行 分析。表 2 顯示了質譜儀的離子源參數。

對雌二醇、睪酮及其同位素標記的內標化合物分析時采用選擇反應監(jiān)測（SRM）離子對，以提供離子比率確認（IRC）。在分時選擇反應監(jiān)測（t-SRM）模式下進行掃描，循環(huán)時間為 0.4 秒。表 3 顯示了在本次分析中所使用的 SRM 相關參數信息。

數據分析：采用 Thermo ScientificTM TraceFinderTM 軟件進行數據采集和數據處理。

結果和討論：雌二醇和睪酮的定量下限（LLOQ）被定義為根據線性校正曲線反算所得到的校正物濃度不超過理論值的 20％、離子比率在目標物 20% 范圍內，且重復進樣計算所得的 %RSD 小于 20% 時的低濃度。血漿中睪酮的 LLOQ 為 2 pg/mL - 20 fg（線性范圍為：2-1000 pg/mL - 圖 1），血漿中雌二醇的 LLOQ 為 20 pg/mL - 200 fg（線性范圍為：20-10,000 pg/mL - 圖 2）。對于所有濃度重復進樣的樣品而言，睪酮和雌二醇的精密度分別小于 8% 和 7%

結論：TSQ Altis 三重四極桿質譜儀為血漿中的雌二醇和睪酮的臨床定量分析研究提供了的靈敏度。在該篇技術文摘所描述的方法中，當采用該方法測定血漿中的睪酮和雌二醇時，定量限分別為 20 pg/mL（柱上進樣 200 fg）和 2 pg/mL（柱上進樣 20 fg）。

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