戴安離子色譜儀的原理是輸液泵將流動相以穩(wěn)定的流速(或壓力)輸送到分析系統(tǒng)中。在色譜柱之前,樣品將被引入樣品注射器。流動相將樣品帶入色譜柱,分離柱內各成分,然后與流動相依次流向檢測器。在抑制型離子色譜法中,在電導檢測器前增加一個抑制系統(tǒng),即用另一個高壓輸液泵將再生液輸送至抑制器。在抑制器中,降低流動相的背景電導率,然后將流出物引入電導率檢測單元,并將檢測到的信號發(fā)送給數據系統(tǒng)進行記錄、處理或保存。
離子色譜法是一種高效液相色譜法,又稱高效離子色譜法或現代離子色譜法。與傳統(tǒng)的離子交換色譜柱色譜不同,樹脂交聯度高,交換容量低,進樣量小。采用柱塞泵輸送洗脫液時,通常對洗脫液進行在線自動連續(xù)電導率檢測。
水中常見糖類的pKa值??梢?,常見單糖、雙糖和糖醇的pKa值一般在L2~14之間,常見的糖醛酸和糖胺的pKa值小于7。當堿性溶液的pH值大于或等于L2時,大多數糖基化物以陰離子的形式存在,因此陰離子交換色譜柱可作為洗脫液分離強堿性溶液。
由于糖分子結構中的疏水部分,糖的分離機理不僅是陰離子交換,而且是疏水吸附。糖類化合物在陰離子交換柱上的保留容量主要取決于其電荷數、分子大小、組成和結構。
安培檢測是一種在適當的外加電位下,測量電化學活性物質發(fā)生氧化或還原反應時電流變化的檢測技術。糖的分離是在堿性條件下完成的,而金電極的檢測條件通常是堿性的,金電極表面可以為糖的電化學氧化提供反應環(huán)境。因此,金電極的檢測與陰離子交換分離有很好的匹配性。由于糖的氧化產物會覆蓋電極表面,造成不可逆的污染,因此需要選擇不同的外加電位對電極表面進行清洗和活化,使電極能夠連續(xù)工作,即脈沖安培檢測。
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