賽默飛高效液相色譜是基于高效液相色譜法的理論及原理,涵蓋了小顆粒填料、非常低系統(tǒng)體積及快速檢測手段等全新技術(shù),增加了分析的通量、靈敏度及色譜峰容量。主要用于各種藥物及其制劑的分析測定,尤其是生物樣品、中藥等復雜體系的成分的分離分析,可對物質(zhì)進行定量定性分析。超高效液相色譜儀的速度、靈敏度及分離度分別是傳統(tǒng)的高效液相色譜儀的9倍、3倍及1.7倍,它縮短了分析時間,同時減少了溶劑用量降低了分析成本。
賽默飛高效液相色譜的操作步驟:
1、過濾流動相,根據(jù)需要選擇不同的濾膜(0.45um)。
2、對抽濾后的流動相進行超聲脫氣10-20分鐘。
3、打開HPLC工作站,連接好流動相管道,連接檢測系統(tǒng)。
4、進入HPLC控制界面主菜單,點擊manual,進入手動菜單。
5、有一段時間沒用,或者換了新的流動相,需要先沖洗泵和進樣閥。沖洗泵,直接在泵的出水口,用針頭抽取。沖洗進樣閥,需要在manual菜單下,先點擊purge,再點擊start,沖洗時速度不要超過10ml/min。
6、調(diào)節(jié)流量,初次使用新的流動相,可以先試一下壓力,流速越大,壓力越大,一般不要超過2000。點擊injure,選用合適的流速,點擊on,走基線,觀察基線的情況。
7、設(shè)計走樣方法。點擊file,選取select users and methods,可以選取現(xiàn)有的各種走樣方法。若需建立一個新的方法,點擊new method。選取需要的配件,包括進樣閥,泵,檢測器等,根據(jù)需要而不同。選完后,點擊protocol。一個完整的走樣方法需要包括:
①、進樣前的穩(wěn)流,一般2-5分鐘;
?、?、基線歸零;
?、邸⑦M樣閥的loading-inject轉(zhuǎn)換;
④、走樣時間,隨不同的樣品而不同。
8、進樣和進樣后操作。選定走樣方法,點擊start。進樣,所有的樣品均需過濾。方法走完后,點擊postrun,可記錄數(shù)據(jù)和做標記等。全部樣品走完后,再用上面的方法走一段基線,洗掉剩余物。
9、關(guān)機時,先關(guān)計算機,再關(guān)液相色譜。
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