本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了保健食品中免疫球蛋白 IgG的測定方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于片劑、膠囊、粉劑類型保健食品中免疫球蛋白 IgG的測定。 本方法檢出限：當(dāng)取樣量 0.1g，稀釋至25mL，進(jìn)樣量20μL時(shí)，檢出濃度為0.5mg/mL。 原理 根據(jù)高效親和色譜的原理，在磷酸鹽緩沖液條件下免疫球蛋白 IgG與配基連接，在pH2.5的鹽酸甘氨酸條件下洗脫免疫球蛋白IgG。 試劑 流動(dòng)相 A：pH6.5 0.05mol/L 磷酸鹽
適用范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了保健食品中免疫球蛋白 IgG的測定方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于片劑、膠囊、粉劑類型保健食品中免疫球蛋白 IgG的測定。
本方法檢出限：當(dāng)取樣量 0.1g，稀釋至25mL，進(jìn)樣量20μL時(shí)，檢出濃度為0.5mg/mL。

原理
根據(jù)高效親和色譜的原理，在磷酸鹽緩沖液條件下免疫球蛋白 IgG與配基連接，在pH2.5的鹽酸甘氨酸條件下洗脫免疫球蛋白IgG。

試劑
流動(dòng)相 A：pH6.5 0.05mol/L 磷酸鹽緩沖液
流動(dòng)相 B：pH2.5 0.05mol/L 甘氨酸鹽酸緩沖液
IgG標(biāo)準(zhǔn)貯備液：稱取IgG標(biāo)準(zhǔn)品（Sigma化學(xué)公司）0.0100g,用流動(dòng)相A（3.1）溶解并定容至10.0mL,搖勻，濃度為1.0mg/mL。
IgG標(biāo)準(zhǔn)系列溶液：取IgG標(biāo)準(zhǔn)貯備液，用用流動(dòng)相A（3.1）稀釋成含IgG 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列。臨用時(shí)配制。

儀器和設(shè)備
高效液相色譜儀具紫外檢測器和梯度洗脫裝置。

分析步驟
試樣處理：稱取 0.1g（精確至0.001g）試樣，用流動(dòng)相A（3.1）稀釋至25.0mL,搖勻，通過0.45μm微孔濾膜后進(jìn)樣。
5.2.1 先用5倍柱體積的重蒸水洗柱，再用10倍柱體積的流動(dòng)相A（3.1）平衡柱，進(jìn)樣，按洗脫程序進(jìn)行洗脫。
5.2.2 HPLC參考條件
色譜柱： Pharmacia HI-Trap Protein G柱，1mL。
波長： 280nm
進(jìn)樣量： 20μL
梯度洗脫表：
Time Flow mL/min A% B% Gradient
0 0.4 100 0 ※
4.5 0.4 100 0 6
5.5 0.4 0 100 6
15.0 0.4 0 100 6
15.5 0.4 100 0 6
22.0 0.4 100 0 6