抑菌試驗/藥敏實驗方法主要有兩種,即擴散法和稀釋法。其中擴散法屬手工測試方法,通過測試藥物紙片或者牛津杯在固體培養(yǎng)基上的抑菌圈的大小,判斷細菌對該種藥物是否敏感。
稀釋法包括試管稀釋法和微量稀釋法,通過測試細菌在含不同濃度藥物培養(yǎng)基內(nèi)的生長情況,判斷其zui低抑菌濃度(MIC)。
由于擴散法操作簡單,成本低,已經(jīng)被大多數(shù)實驗室和基層單位所采用。擴散法又包括紙片法、牛津杯法和打孔法。
一、實驗原理
1、將培養(yǎng)基平板置培養(yǎng)箱中培養(yǎng),一方面試驗菌(指示菌)開始生長繁殖;另一方面抗生素呈球面擴散,形成遞減的梯度濃度,離杯越近,抗生素濃度越大,離杯越遠抗生素濃度越小。
2、在牛津杯周圍抑菌濃度范圍內(nèi)的細菌的生長被抑制,形成透明的抑菌圈。
3、抑菌圈的大小反映測試菌對測定藥物的敏感程度(藥敏實驗)或藥物對指示細菌的抑菌程度(抑菌試驗)。
4、抗生素濃度越高,抑菌圈越大。
5、在抑菌圈的邊緣處,瓊脂培養(yǎng)基中所含抑菌物質(zhì)的濃度即為該菌懸液中對該種指示菌的zui低抑菌濃度(MIC) 。
6、抑菌圈直徑與藥物對測試菌的zui低抑菌濃度 呈負相關,即抑菌圈愈大,MIC愈小。
二、實驗材料
培養(yǎng)基:牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基
菌種:大腸桿菌(E.coli)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)
藥品:阿莫西林、黃芪多糖、
其他:牛津杯、培養(yǎng)皿、酒精棉、酒精燈、涂布器、移液槍、1mL、200uL槍頭、恒溫培養(yǎng)箱、超凈工作臺、接種環(huán)
“牛津杯”可從北京吉泰遠成科技有限公司采購,牛津杯是內(nèi)徑為6mm,外徑為7.8mm,高10mm的圓筒形管子,管子的重量盡可能相等。
三、實驗操作
1. 倒平板:將已滅菌的瓊脂培養(yǎng)基加熱到*融化,倒在培養(yǎng)皿內(nèi),每皿約20ml,凝固。
2. 標記:菌種、牛津杯擺放位置、藥物及其 濃度
3. 制備菌懸液:用生理鹽水洗下試管內(nèi)的菌苔并稀釋。
4. 菌液涂布:吸取1mL 菌液入平板表面,用涂布器涂布將菌液涂布均勻
5. 擺放牛津杯:在培養(yǎng)基表面垂直擺放牛津杯,輕輕加壓,使其與培養(yǎng)基接觸無空隙。
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