出血性大腸桿菌O157:H7檢測試劑盒說明書
廣州健侖生物科技有限公司
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(一)生化管的使用方法
本安瓿瓶已在凹頸處有割口,請以瓶子上的藍點為受力點,用手以柔力掰開(注意:如安瓿瓶上沒有藍點的,則用砂輪在安瓿瓶的凹頸處劃痕,然后再掰開)!本鑒定盒配套的塑料帽已滅菌。所有的安瓿瓶、吸塑架、塑料帽在使用后均高壓滅菌后方可棄去。
(二)出血性大腸桿菌O157:H7生化鑒定盒的詳細使用方法
出血性大腸桿菌O157:H7為革蘭氏陰性桿菌,需氧或兼性,有周鞭毛,并有菌毛,不產(chǎn)生芽孢的桿菌。發(fā)酵乳糖,不發(fā)酵或遲緩發(fā)酵山梨醇。氧化酶陰性。MUG陰性。從分離培養(yǎng)平板上挑取可疑菌苔接種于每種微量生化管內(nèi)。將已接種的生化管套上無菌塑料帽,直立于三折吸塑短架內(nèi),于35-37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),結(jié)果觀察見表1。注意:如有特殊的接種方式或培養(yǎng)時間,請詳見每種生化管附帶的使用說明。
表1
產(chǎn)品名稱 | 結(jié)果判定 | 培養(yǎng)時間 (小時) | 使用說明 | |
陽性 | 陰性 | |||
山梨醇 | 黃色 | 紫色 | 8-24 |
|
纖維二糖 | ||||
棉子糖 | ||||
蛋白胨水 | 紅色 | 不變色 | 24 | 培養(yǎng)后加靛基質(zhì)試劑2-3滴,立即觀察結(jié)果。 |
西蒙氏枸櫞酸鹽 | 藍色 | 不變色 | 24-48 | 用接種針挑取新鮮菌苔在斜面上劃“之”字形接種,豎立培育。 |
鳥、賴氨酸脫羧酶 | 試驗管藍綠色, 對照管變黃 | 試驗管與對照管均變黃 | 18-24 | 每株被檢菌應(yīng)同時接種氨基酸對照管一支,并加滅菌液體石蠟5-8滴覆蓋培養(yǎng)基表面。培養(yǎng)18-24小時,未見陽性結(jié)果,繼續(xù)培養(yǎng)4天,再做終結(jié)果判定。 |
半固體瓊脂 | 擴散生長 | 無擴散生長 | 24—48 | 用接種針挑取新鮮菌苔穿刺接種,豎立培育。 |
三糖鐵瓊脂 | 產(chǎn)酸變黃色, 產(chǎn)硫化氫變黑色 | 不變色 | 24 | 用接種針挑取新鮮菌苔穿刺,穿刺完畢后在斜面上劃“之”字形接種,豎立培育。 |
葡萄糖磷酸鹽胨水 | MR: 紅色 | 不變色 | 96 | 培養(yǎng)后加MR試劑2-3滴,立即觀察結(jié)果。 |
VP: 紅色 | 不變色 | 48 | 培養(yǎng)后依次加入8滴VP試劑甲液及4滴乙液,混勻,再培養(yǎng)10-20分鐘觀察結(jié)果。 |
試驗項目 | 結(jié)果判定 |
山梨醇 | 陰性或遲緩 |
纖維二糖 | 陰性 |
棉子糖 | 陽性 |
蛋白胨水 | 陽性 |
西蒙氏枸櫞酸鹽 | 陰性 |
鳥氨酸脫羧酶 | 陽性 |
賴氨酸脫羧酶 | 陽性 |
半固體瓊脂 | 有動力或無動力 |
三糖鐵瓊脂 | 底及斜面呈黃色H2S陰性 |
葡萄糖磷酸鹽胨水 | MR 陽性 VP 陰性 |
備注:本鑒定盒是按照產(chǎn)品目錄中的品種成份從左到右的順序擺放。
(三)出血性大腸桿菌O157:H7的和生化鑒定特征(見表2)
表2 大腸桿菌O157:H7的生化特征
試驗項目 | 結(jié)果判定 |
山梨醇 | 陰性或遲緩 |
纖維二糖 | 陰性 |
棉子糖 | 陽性 |
蛋白胨水 | 陽性 |
西蒙氏枸櫞酸鹽 | 陰性 |
鳥氨酸脫羧酶 | 陽性 |
賴氨酸脫羧酶 | 陽性 |
半固體瓊脂 | 有動力或無動力 |
三糖鐵瓊脂 | 底及斜面呈黃色H2S陰性 |
葡萄糖磷酸鹽胨水 | MR 陽性 VP 陰性 |
注:“+” 陽性; “—” 陰性 ;“+/-” 陽性或陰性
凡用于上述方法在被檢食品中分離獲得的純菌落,經(jīng)用抗E.coli O157:H7標(biāo)準(zhǔn)血清或EHEC O157:H7。乳膠凝集試劑測試,呈陽性結(jié)果即可報告為該食品試樣中檢出腸出血性大腸桿菌O157:H7。
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