沙氏瓊脂培養(yǎng)基(SDA)的使用方法與應用！

一、背景

沙氏瓊脂培養(yǎng)基(SDA)用于黑曲霉及白念珠菌的分離培養(yǎng)，還用于一次性使用衛(wèi)生用品真菌菌落總數(shù)檢測(GB15979-2002)。原理：蛋白胨提供碳源和氮源;葡萄糖提供能源;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑;氯霉素可抑制細菌的生長。

配方(每升)：蛋白胨10g；葡萄糖40g；瓊脂15g；氯霉素0.1g；最終pH 6.0±0.2

二、使用方法

1、稱取本品65.1g，加入蒸餾水或去離子水1 L，攪拌加熱煮沸至*溶解，分裝三角瓶，115℃高壓滅菌15min，備用。

2、取樣液接種5個平皿，每個平皿中加入1mL，然后加入15 mL左右已溶化并保溫至45℃左右的培養(yǎng)基，搖勻，凝固后，置25±2℃培養(yǎng)7d。

3、分別于3、5、7天觀察結(jié)果，計算平板上的菌落數(shù)，并求平均值。

白念珠菌是一種腐物寄生菌，平時生存于人體的皮膚、粘膜、消化道及其他臟器中，當機體抵抗力降低時，白色念珠菌就會繁殖，達到一定量時，人體就會發(fā)病，所以白念珠菌是一種條件致病菌。

三、應用

用于念珠菌ERG3基因突變對抗真菌藥物耐藥的作用研究：

侵襲性真菌感染發(fā)病率不斷上升，以念珠菌感染為主，其中白念珠菌為主。但由于預防性使用抗真菌藥物，非白念珠菌尤其是對氟康唑天然耐藥的克柔念珠菌感染出現(xiàn)上升趨勢，但白念珠菌感染仍占優(yōu)勢。

隨著白念珠菌和克柔念珠菌對唑類抗真菌藥物的耐藥現(xiàn)象越來越嚴重，深入研究其耐藥機制迫在眉睫。

了解白念珠菌和克柔念珠菌對常用抗真菌藥物的敏感性，對白念珠菌耐藥菌株和敏感菌株ERG3基因擴增、測序、生物信息學分析，明確白念珠菌ERG3基因突變與抗真菌藥物耐藥之間的關(guān)系。

方法：收集患者無菌體液標本，使用沙氏培養(yǎng)基、玉米吐溫80瓊脂培養(yǎng)基、CHROMagar念珠菌顯色培養(yǎng)基和API 20C AUX鑒定系統(tǒng)進行念珠菌的分離和鑒定。從中分別選取35株白念珠菌和20株克柔念珠菌進行體外藥物敏感性試驗，確立耐藥菌株和敏感菌株。對白念珠菌ERG3基因進行PCR擴增、測序，最后應用BLAST軟件進行比對分析。

結(jié)果：檢出的163株真菌中，白念珠菌54.61%，非白念珠菌42.94%，霉菌2.45%。其中非白念珠菌從高到低依次為克柔念珠菌(16.57%)、光滑念珠菌(14.72%)、熱帶念珠菌(4.91%)、近平滑念珠菌(4.29%)和葡萄牙念珠菌(2.45%)；

Logistic多因素回歸分析結(jié)果顯示：性別、病程、體溫、預防性使用抗真菌藥物、免疫抑制劑、有創(chuàng)傷的檢查和治療、患者預后和地域因素是住院患者無菌體液標本中侵襲性真菌感染的獨立危險因素。

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