伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基(EMB)的使用方法與應(yīng)用！

一、背景

伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基(EMB)用于分離革蘭氏陰性腸道菌特別是大腸菌群和糞大腸菌群(GB/T4789.38-2008，GB15979-2002，SN0169-92，化妝品衛(wèi)生規(guī)范2007版和GB5750.12-2006)。

二、原理

當(dāng)大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸時(shí)細(xì)菌帶正電荷被染成紅色，再與美藍(lán)結(jié)合形成紫黑色菌落，并帶有綠色金屬光澤。而產(chǎn)氣桿菌則形成呈棕色的大菌落。

在堿性環(huán)境中不分解乳糖產(chǎn)酸的細(xì)菌不著色，伊紅和美藍(lán)不能結(jié)合，故沙門氏菌等為無(wú)色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)。

常用的伊紅美藍(lán)乳糖培養(yǎng)基，可用來(lái)鑒別飲用水和乳制品中是否存在大腸桿菌等細(xì)菌。如果有大腸桿菌，因其強(qiáng)烈分解乳糖而產(chǎn)生大量的混合酸，菌體帶H+，故菌落被染成深紫色，從菌落表面的反射光中還可以看到金屬光澤。

三、使用方法

1、制作伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基，趁熱注入培養(yǎng)皿中，凝成平板，待用。

2、用滅過(guò)菌的錐形瓶盛取河水或溝水，按1：10稀釋。

3、取0.1毫升稀釋液接種于伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上。用平板劃線分離法進(jìn)行分離。

4、將劃線后的培養(yǎng)皿倒置37℃溫箱中培養(yǎng)18～24小時(shí)。培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)大腸桿菌菌落，菌落中心呈暗藍(lán)黑色，發(fā)金屬光澤。

5、將菌落接種于斜面培養(yǎng)基上（由營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基制成）。

四、應(yīng)用

用于雞大腸桿菌噬菌體的分離鑒定及初步應(yīng)用研究：

從某大型養(yǎng)雞場(chǎng)采集糞便樣品，分離、純化、鑒定多株大腸桿菌，利用分離純化的大腸桿菌為宿主菌，從糞便中分離對(duì)應(yīng)噬菌體，并對(duì)其中一株噬菌體進(jìn)行生物學(xué)特性的測(cè)定。

用篩選到噬菌體的所有大腸桿菌菌株，通過(guò)飲水、腹腔注射等不同途徑對(duì)雞進(jìn)行攻毒，建立和優(yōu)化雞大腸桿菌病動(dòng)物模型。利用相應(yīng)噬菌體通過(guò)口服、腹腔注射等不同方式對(duì)雞大腸桿菌病進(jìn)行治療性試驗(yàn)，驗(yàn)證治療效果，為雞大腸桿菌噬菌體的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。大腸桿菌的分離鑒定。

從某大型養(yǎng)雞場(chǎng)采集糞便樣品，放入生理鹽水中攪拌，上清經(jīng)平板劃線法依次在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上進(jìn)行分區(qū)劃線，并將得到的單個(gè)菌落在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上進(jìn)行純化。

然后，將純化后的大腸桿菌經(jīng)革蘭氏染色、微量生化反應(yīng)進(jìn)一步鑒定。共從糞便中分離純化20株大腸桿菌，所有菌株在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基呈紅色或粉紅色，在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上呈暗紫色且?guī)в芯G色金屬光澤；經(jīng)革蘭氏染色，光學(xué)顯微鏡下拍照觀察，菌體呈紅色、短桿狀；采用細(xì)菌微量生化反應(yīng)管對(duì)各菌株進(jìn)行生化鑒定，顯示各菌株為大腸桿菌。噬菌體的分離鑒定。

以分離的20株大腸桿菌為宿主菌，采用雙層瓊脂平板法從糞便中分離噬菌體，結(jié)合液體增殖法將噬菌體進(jìn)行純化；采用點(diǎn)滴法對(duì)所分離噬菌體進(jìn)行宿主交叉感染試驗(yàn)；將富集的Bp5、Bp6噬菌體用2%磷鎢酸進(jìn)行負(fù)染，利用透射電鏡觀察噬菌體的形態(tài)。

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