血漿游離DNA提取試劑盒的應(yīng)用！

一、背景

血漿游離DNA提取試劑盒適合于從血漿、血清等無細胞組織液中提取游離DNA（Circulating free DNA,cfDNA）片段,純化的cfDNA產(chǎn)量高、質(zhì)量好，限度去除蛋白、脂類及其他抑制性雜質(zhì)污染，可直接用于各種下游操作，包括基因測序（例如產(chǎn)前基因檢測、腫瘤檢測）、文庫構(gòu)建等。

血漿游離DNA提取試劑盒采用具有*分離作用的磁珠和*的緩沖液系統(tǒng)，從血清，血漿等樣本中分離純化高質(zhì)量游離DNA。*包埋的磁珠，在一定條件下對核酸具有很強的親和力，而當(dāng)條件改變時，磁珠釋放吸附的核酸，能夠達到快速分離純化核酸的目的。整個過程安全、便捷，提取的游離DNA得率高，純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠，尤其適合高通量工作站的自動化提取。

血中cfDNA簡稱循環(huán)核酸（circulating free DNA），是指循環(huán)血中游離于細胞外的部分降解了的機體內(nèi)源性DNA。在這里，循環(huán)核酸不可顧名思義為循環(huán)血中的核酸類物質(zhì)，所有細胞內(nèi)的核酸，血中游離的內(nèi)源性脫氧核糖核酸和外源性DNA與RNA，如真菌血癥、細菌血癥和病毒血癥等病理情形下的血中外源核酸，雖然其在臨床醫(yī)學(xué)中具有重要意義但均不屬于嚴格意義的血中cfDNA范疇。

血中cfDNA在疾病的早期診斷、預(yù)后、監(jiān)測等方面具有重要潛在價值。其具體醫(yī)學(xué)應(yīng)用大致包括以下方面：

1、用于產(chǎn)前診斷；

2、用于免疫性疾病等非腫瘤類疾病的病情分析與療效觀察；

3、用于腫瘤相關(guān)分析。

在上述三類應(yīng)用中，其在腫瘤分析中的價值尤為重要，雖然目前血中cfDNA分析尚未列為臨床必需的檢測指標，但數(shù)以千計的研究論文和大量一期和二期臨床試驗的數(shù)據(jù)，有力支持這一新技術(shù)在腫瘤防治中的巨大應(yīng)用價值。

二、應(yīng)用

用于血漿游離DNA定量檢測及COL14A1基因異常甲基化分析在食管鱗癌診斷中的意義研究：

與肝癌、腸癌、卵巢癌等常見腫瘤相比,食管癌的診斷和監(jiān)測尚缺乏相對有效的腫瘤標志物。循環(huán)游離)NA(circulating cell-free DNA,cfDNA),是指血清或血漿中游離于細胞外的DN段。已有研究顯示,對循環(huán)游離DNA進行定量檢測有潛在的腫瘤標志物作用。但這些研究研究數(shù)據(jù)相差較大,對食管鱗癌的研究也并不多見。本研究的目的是對血漿游離DNA定量檢測在鑒別食管鱗癌與健康人的能力進行研究,探討血漿游離DNA定量檢測在食管鱗癌診斷中的潛在臨床應(yīng)用價值。

方法：

對60例健康人、49例食管鱗癌患者的血漿標本提取并純化血漿游離DNA,應(yīng)用實時熒光定量PCR(SYBR GreenⅠ)方法進行定量檢測,分析健康人與食管鱗癌患者之間、不同臨床病理特征食管鱗癌患者之間血漿游離DNA水平的差異,并通過ROC曲線對血漿游離DNA水平診斷食管鱗癌的能力進行評價。

結(jié)果：

1、60例健康人血漿游離DNA含量中位數(shù)為17.91ng/m1,四分位區(qū)間：12.99～29.90ng/ml。其中男性組血漿游離循環(huán)DNA水平中位數(shù)(19.10ng/m1)與女性組(17.17ng/m1)無顯著差異(P=0.382)；≤60歲組(18.17ng/m1)與>60組(15.46ng/m1)亦無顯著差異(P=0.374)。

2、49例食管鱗癌患者血漿游離DNA含量中位數(shù)為49.72ng/m1,四分位區(qū)間：28.17-68.42ng/m1。其中男性組血漿游離循環(huán)DNA中位數(shù)(51.14ng/m1)與女性組(38.26ng/m1)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.382),≤60歲組(45.81ng/m1)與>60組(51.14ng/m1)差異亦無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.374)。

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