腦心浸出液瓊脂的檢驗(yàn)原理與應(yīng)用！

一、背景

腦心浸出液瓊脂用于鏈球菌和腸球菌及其它對(duì)營養(yǎng)苛求菌的培養(yǎng)，成分：腦心浸出粉8.0g，動(dòng)物組織胃酶消化物5.0g，胰酪蛋白胨16.0g，氯化鈉5.0g，磷酸氫二鈉2.5g，葡萄糖2.0g，瓊脂13.5g，pH7.4±0.2(25℃)。

二、檢驗(yàn)原理

胰蛋白質(zhì)胨和牛心浸粉提供氮源、維生素和生長因子；葡萄糖可為多種細(xì)菌提供能源；氯化鈉維持均衡的滲透壓；磷酸氫二鈉為緩沖劑。

用法：稱取本品50.1g加入1000ml蒸餾水，加熱溶解并不停攪拌，煮沸不要超過1分鐘。分裝三角瓶，121℃高壓滅菌15分鐘。取1ml制備好的樣品液加入直徑為9cm無菌平皿中心，傾入冷卻至45-50℃培養(yǎng)基約15ml，混勻，凝固后，36±1℃倒置培養(yǎng)18～24h?；蚶鋮s至45-50℃時(shí)，傾入無菌平皿，瓊脂*凝固后，在37℃的培養(yǎng)箱中倒置放置1-2小時(shí)，加入適當(dāng)稀釋度的樣品液1ml，涂布于培養(yǎng)基上，36±1℃培養(yǎng)18～24h。

鏈球菌是化膿性球菌的另一類常見的細(xì)菌，廣泛存在于自然界和人及動(dòng)物糞便和健康人鼻咽部，大多數(shù)不致病。醫(yī)學(xué)上重要的鏈球菌主要有化膿性鏈球菌、草綠色鏈球菌、肺炎鏈球菌、無乳鏈球菌等。引起人類的疾病主要有：化膿性炎癥、毒素性疾病和超敏反應(yīng)性疾病等。

腸球菌（Enterococcus）屬腸球菌屬，是人類和動(dòng)物腸道正常菌群的一部分，通常在引起腹腔和盆腔感染所分離的混合菌絲中發(fā)現(xiàn)，既往認(rèn)為腸球菌是對(duì)人類無害的共棲菌，但近年研究已證實(shí)了腸球菌的致病力。在需氧革蘭陽性球菌中，它是僅次于葡萄球菌的重要院內(nèi)感染致病菌，腸球菌亦可引起院外感染。腸球菌不僅可引起尿路感染、皮膚軟組織感染，還可引起危及生命的腹腔感染、敗血癥、心內(nèi)膜炎和腦膜炎等。

三、應(yīng)用

用于醫(yī)院獲得性耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的分子流行病學(xué)研究研究：

應(yīng)用多重PCR方法對(duì)醫(yī)院內(nèi)感染的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA,Methicillin-resistant Staphylococcus aureus）進(jìn)行葡萄球菌染色體mec元件（SCCmec）分型,以發(fā)現(xiàn)MRSA院內(nèi)感染的流行病學(xué)分布特征,為分析MRSA造成醫(yī)院內(nèi)感染的傳播途徑、發(fā)生機(jī)理及降低MRSA院內(nèi)感染的發(fā)生率奠定基礎(chǔ)。方法:收集臨床分離的96株金黃色葡萄球菌,其中痰標(biāo)本74株;血液標(biāo)本3株;腹腔引流物1株;傷口分泌物15株;尿液1株;胸腔引流物1株;足部膿腫標(biāo)本1株。

應(yīng)用Vitek全自動(dòng)生化分析儀鑒定金黃色葡萄球菌,按NCCLS2002年第十二版操作指南,應(yīng)用K-B法進(jìn)行抗生素敏感試驗(yàn);

應(yīng)用瓊脂稀釋法測(cè)定每株菌對(duì)苯唑青霉素的抑菌濃度（MIC）值;鑒定后的菌株置于含腦心浸出液的培養(yǎng)管中培養(yǎng)進(jìn)行增菌培養(yǎng);

常規(guī)方法提取MRSA細(xì)菌DNA后,應(yīng)用多重PCR方法對(duì)MRSA進(jìn)行SCCmec基因分型,并結(jié)合臨床資料分析。

結(jié)果:藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示96株MRSA對(duì)青霉素及環(huán)丙沙星均耐藥,苯唑青霉素的MIC為64—1024mg/L,對(duì)紅霉素、四環(huán)素、甲氧芐啶/磺胺甲惡唑、克林霉素的耐藥率分別為98.9%、98.9%、94.7%,對(duì)萬古霉素全部敏感。

SCCmec分型結(jié)果顯示96株MRSA中有91株屬于SCCmec-Ⅲ型;1株屬于SCCmec-ⅢA亞型;2株屬于SCCmec-Ⅳ型;1株屬于SCCmec-Ⅰ型;1株屬于未定型株（NT SCCmec型）。

菌株科室分布情況為神經(jīng)科25株;呼吸科15株;老年病科12株;神經(jīng)外科10株;內(nèi)分泌科6株;矯形科4株;心內(nèi)科4株;肝膽外科3株;創(chuàng)傷外科3株;風(fēng)濕科2株;胸外科2株;普外科2株;泌尿科2株;燒傷科1株;ICU1株;急診室1株;耳鼻喉科1株;皮膚科1株;消化科1株。其中SCCmec-ⅢA亞型來源于神經(jīng)外科;SCCmec-Ⅳ型來源于呼吸科和矯形科;SCCmec-Ⅰ型來源于內(nèi)分泌科。

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