一、怎樣選擇色譜柱

現(xiàn)代液相色譜中，分離效果好壞很大程度上取決于色譜填料的選擇。但是色譜填料的選擇范圍很寬，要做合適的選擇，必須對此有一定的認(rèn)識和了解。

1、正相色譜

正相色譜用的固定相通常為硅膠（Silica），以及其他具有極性官能團(tuán)，如胺基團(tuán)（NH2,APS）和氰基團(tuán)（CN，CPS）的鍵合相填料。

 由于硅膠表面的硅羥基（SiOH）或其他團(tuán)的極性較強(qiáng)，因此，分離的次序是依據(jù)樣品中的各組份的極性大小，即極性強(qiáng)弱的組份zui先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低，如：正乙烷（Hexane）,氯仿（Chloroform）,二氯甲烷（Methylene  Chloride）等。

2、反相色譜

反相色譜填料常是以硅膠為基礎(chǔ)，表面鍵合有極性相對較弱的官能團(tuán)的鍵合相。

反相色譜所使用的流動相極性較強(qiáng)，通常為水，緩沖液與甲醇，已腈等混合物。

樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)組合zui先被沖出，而極性弱的組份會在色譜柱上有更強(qiáng)的保留。

常用的反相填料有C18（ODS）、C8（MOS）、C4（B）、C6H5（Phenyl）等。

二、聚合物填料

聚合物調(diào)料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等，其主要優(yōu)點(diǎn)是在PH值為1～14均可使用。

相對與硅膠基質(zhì)的C18填料，這類填料具有更強(qiáng)的疏水性；大孔的聚合物填料對蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效。

現(xiàn)在的聚合物填料的缺點(diǎn)是相對硅膠基質(zhì)填料，色譜柱柱效較低。

三、其他無機(jī)填料

其它HPLC的無機(jī)填料色譜柱也已經(jīng)商品化。由于其特殊的性質(zhì)，一般于特殊的用途。如石墨化碳也用于正逐漸成為反相色譜填料。這種填料的分離不同與硅膠基質(zhì)烷基鍵合相，石墨化碳的表面即是保留的基礎(chǔ)，不再需其它的表面改性，該柱填料一般比烷基鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強(qiáng)，石墨化碳可用于分離某些幾何導(dǎo)構(gòu)體，又由于HPLC流動相中不會被溶解，這類柱可在任何PH與溫度下使用。氧化鋁也可用于HPLC，氧化鋁微粒剛性強(qiáng)，可制成穩(wěn)定的色譜柱柱床，其優(yōu)點(diǎn)是可在PH高達(dá)12的流動相中使用。但由于氧化鋁與堿性化合物作用也很強(qiáng)，應(yīng)用范圍受到一定的限制，所以未能廣泛應(yīng)用，新型氧化鋯填料也可用于HPLC，商品化的僅有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱，應(yīng)用PH范圍1～14，溫度可達(dá)100℃。由于氧化鋯填料幾年才開始研究，加之面臨的實(shí)驗(yàn)難度，其重要用途與優(yōu)勢尚在進(jìn)行中。

怎樣選擇填料粒度

 一、如何保證良好的柱性能與柱壽命

HPLC固定相及應(yīng)用范圍

二、如何解決色譜柱使用過程中出現(xiàn)的問題

1.保留值與分離度重現(xiàn)性不好原因分析

 2.造成色譜峰（不對稱）拖尾的原因 

3.如何解決峰形拖尾的問題

A．與化學(xué)有關(guān)的拖尾問題

B．與色譜柱有關(guān)的拖尾問題

C．與HPLC 系統(tǒng)有關(guān)的峰拖尾和峰加寬

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 1．防止緩沖溶液和水溶液流動相產(chǎn)生微生物，做到流動相用多少配多少，或在水流動相中加200ppm的疊氮鈉以抑制細(xì)菌成長（一定當(dāng)心其毒性和潛在的爆炸性）；或在流動相中加20%的有機(jī)改性劑，也可抑制微生物生長，有機(jī)改性劑還有助于流動相脫氣。

2．盡可能將色譜柱貯存于100%有機(jī)溶劑（乙晴）中，避免在緩沖溶液中保存。

3．使用緩沖溶液后的色譜柱，應(yīng)用15～20倍柱體積的不含緩沖劑的同種水—有機(jī)溶劑流動相沖洗色譜柱，后換成100%有機(jī)溶劑儲存。

4．避免用純凈水沖洗鍵合致密的C18柱。

5．將色譜柱的兩端用堵頭擰好，以免柱床填料干裂。

如何選擇保護(hù)柱

大多數(shù)人是根據(jù)色譜分析柱的填料選擇保護(hù)柱的填料，正常情況下可以選擇與分析色譜柱一樣的色譜填料。但是，根據(jù)實(shí)際的分析工作，也可不必與分析色譜柱的填料*相匹配。

對于選擇保護(hù)柱的原則是：在滿足分析分離要求的前提條件下，盡可能的選擇較短的保護(hù)柱結(jié)構(gòu)，盡可能選擇對分離樣品小一些保留性的填料。