動(dòng)物內(nèi)臟、肌肉組織、血液以及培養(yǎng)的細(xì)胞和細(xì)菌等樣本在裂解液和蛋白酶K的作用下破碎并可使大部分蛋白質(zhì)變性,釋放出基因組DNA。在其所提供的合適的鹽離子和pH環(huán)境的作用下,與乙醇混合后,基因組DNA特異性地結(jié)合于膜上,大部分蛋白質(zhì)及其他雜質(zhì)在兩次洗滌過程中被洗下,而DNA與膜結(jié)合牢固,在洗脫液的作用下被洗下。
本試劑盒可以從多種樣本中提取基因組DNA,包括動(dòng)物內(nèi)臟、肌肉組織、血液以及培養(yǎng)的細(xì)胞和細(xì)菌等。本法基于對基因組DNA具有高度選擇性的高分子膜材料,只需幾個(gè)步驟即可完成提取過程,在30分鐘內(nèi)完成高純度DNA的提取。
本試劑盒提取的DNA可以用于Real-time PCR、測序等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
儲(chǔ)存運(yùn)輸:蛋白酶K保存于2~8℃。其余成分可室溫儲(chǔ)存。保存得當(dāng)可穩(wěn)定使用18個(gè)月。
儲(chǔ)存運(yùn)輸:蛋白酶K保存于2~8℃。其余成分可室溫儲(chǔ)存。保存得當(dāng)可穩(wěn)定使用18個(gè)月。
操作步驟:
1.將200μL上述樣本和10μL蛋白酶K加入一只新的1.5mL離心管,然后加入200μL裂解液,震蕩混勻5-10秒。
2.56℃溫育10分鐘。
3.在上述離心管中加入200μL無水乙醇,充分震蕩混勻5-10秒(此步驟不可離心)。
4.將步驟4混勻的液體吸取至一只套有收集管的吸附柱上(注意不要吸到懸浮的雜質(zhì),以免阻塞吸附膜),6000-8000rpm離心1分鐘,棄去管內(nèi)液體。
5.將500μL去蛋白漂洗液加入吸附柱中,10000rpm離心30-60秒,棄去管內(nèi)液體。
6.將700μL洗滌液加入吸附柱中,10000rpm離心30-60秒,棄去管內(nèi)液體。
7.將吸附柱放回接液管上,13000rpm離心2分鐘。
8.將吸附柱轉(zhuǎn)移到一只干凈的1.5mL離心管(不提供)中。
9.向吸附柱內(nèi)加50-100μL洗脫液,室溫靜置1分鐘,13000rpm離心1分鐘,棄吸附柱,離心管中液體含有基因組DNA。提純的DNA如果不立刻使用,請保存于-20℃。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對其真實(shí)性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。