BUNSEN本生分享：熒光定量PCR耗材的選擇

　　PCR是分子生物學(xué)研究的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)，用于在短時(shí)間內(nèi)將單拷貝的目標(biāo)DNA序列擴(kuò)增至數(shù)百萬拷貝。除了選擇可靠的PCR儀外，用于PCR反應(yīng)的塑料耗材除考慮兼容性，還要求避免存在污染物和抑制劑，同時(shí)又具有可保障最佳PCR效果的高質(zhì)量。因此，如何選擇作為用戶，了解如何選擇PCR / qPCR耗材，顯得尤其重要。

　　第一步，選擇通量

　　根據(jù)樣品數(shù)量選擇通量，PCR耗材的最常見規(guī)格為：

　　管：0.5 mL, 0.2 mL, 0.1 mL

　　96 孔板：0.2 mL, 0.1 mL

　　384 孔板：0.02 mL

　　單管

　　8聯(lián)管

　　96孔板

　　384孔板

　　第二步， 選擇加樣體積：不同類型管，可供選擇的容量體積不同。

　　單管: 0.5 mL, 0.2 mL(標(biāo)準(zhǔn)), 0.1 mL(低容，或稱快速)

　　8聯(lián)管： 0.2 mL(標(biāo)準(zhǔn)), 0.1 mL(低容，或稱快速)

　　96 孔板：0.2 mL(標(biāo)準(zhǔn)), 0.1 mL(低容，或稱快速)

　　384 孔板：0.02 mL

　　“(低容)”意味著高度更低。 低容耗材更短的設(shè)計(jì)程度減少了反應(yīng)體系上方的空間，降低了蒸發(fā)的影響并提高了熱傳導(dǎo)效率，因此也被稱為“快速”管或板。

　　第三步， 對于PCR板的選擇，需要進(jìn)一步根據(jù)實(shí)驗(yàn)類型和儀器選擇裙邊、切割角、顏色等。

　　3.1裙邊： 根據(jù)儀器加熱模塊類型選擇

　　無裙邊:

　　兼容絕大多數(shù)PCR儀和實(shí)時(shí)PCR儀的模塊，易于剪裁，但不適用于自動化應(yīng)用。

　　半裙邊：

　　板的邊緣周圍具有短的邊緣，加熱或移液過程中提供足夠的支撐，不宜變形彎曲

　　全裙邊：

　　有覆蓋板高度的邊緣，適用于自動化操作

　　3.2顏色： 透明或白色

　　PCR板通常提供透明、磨砂或白色不同的顏色形式，以適用于不同類型PCR反應(yīng)。在實(shí)時(shí)PCR的反應(yīng)時(shí)，與透明耗材相比，我們更推薦使用白色塑料耗材，以實(shí)現(xiàn)靈敏和準(zhǔn)確的熒光檢測。

　　白色耗材通過阻止熒光折射出管來提高qPCR數(shù)據(jù)的靈敏度和一致性。折射被最小化時(shí)，更多的信號被反射回檢測器，從而增加信噪比(圖B)。此外，白色管壁可阻止熒光信號傳遞至PCR儀模塊，避免被吸收或不一致地反射熒光信號，從而使重復(fù)實(shí)驗(yàn)中的差異降至低。在極少數(shù)情況下，如果熒光探測器由于白色孔的信號反射增強(qiáng)而過飽和，可以使用磨砂孔替代。

　　3.4 切角

　　切角是對PCR板的一個(gè)角缺失，取決于所需要適配的儀器。切角可能位于96孔板的H1，H12或A12位置，或384孔板的A24位置

　　3.5品牌選擇

　　市場上有許多品牌和廠家提供PCR耗材，選擇時(shí)需要考慮哪些因素呢? PCR耗材品質(zhì)由包括原料、無污染、一致性等決定。

　　1. 原料：Thermo Scientific選用優(yōu)質(zhì)的全新醫(yī)用級聚丙烯原料

　　2. 生產(chǎn)環(huán)節(jié)：十萬級潔凈車間生產(chǎn)，無RNase、DNase和外源DNA污染

　　3. 批間一致性：遵循嚴(yán)格的生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)和檢測標(biāo)準(zhǔn)，由資深專家使用的設(shè)備進(jìn)行生產(chǎn)，確

　　保批間一致性和可追溯性，確保用戶獲得可靠PCR實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

　　第四步，選擇正確的PCR膜

　　PCR板選好后，還需要選擇一張好的PCR膜來密封，才能保證獲得準(zhǔn)確可靠的PCR數(shù)據(jù)，這對實(shí)時(shí)PCR尤其重要!

　　我們的Thermo Scientific™ Absolute™ qPCR粘性封口膜(貨號AB1170)產(chǎn)品采用壓力敏感密封設(shè)計(jì)。只有在施加壓力的情況下，這種非粘性粘合產(chǎn)品才可以粘合到孔的邊緣上。其只在需要粘合的位置產(chǎn)生良好的密封效果，使孔開口位置變得超透明，實(shí)現(xiàn)的熒光信號傳輸。

　　強(qiáng)效壓敏粘附，可產(chǎn)生牢固的粘合效果，以盡量減少蒸發(fā)，使每個(gè)樣本保持較高的PCR效率

　　其光學(xué)透明度可用于qPCR及其他熒光應(yīng)用

　　一致的封口厚度和透明度，確保整塊板信號傳輸相等

　　可剝離，剝離后平板上無粘性殘留

　　膜兩端無粘性，輕松進(jìn)行密封和去除操作

　　適用溫度范圍：–80°C至110°C

　　PCR耗材 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。