蛋白質(zhì)免疫印跡膜再生液的使用方法及操作流程！

百歐博偉生物：自1979年推出以來，蛋白質(zhì)印跡（WB）成為一種簡單而廉價的技術(shù)。目前，WB 被廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)的檢測和半定量及其表達水平的研究。在實際應(yīng)用中，我們經(jīng)常反復(fù)剝離和再檢測，以檢測印跡膜上的不同蛋白質(zhì)來節(jié)省時間和金錢。然而，每一輪剝離會去除一些轉(zhuǎn)移到印跡膜上面蛋白，影響實驗結(jié)果。本文將介紹一種蛋白質(zhì)免疫印跡膜再生液的使用方法。

蛋白質(zhì)免疫印跡流程

步驟（1）：采用蛋白質(zhì)免疫印跡膜，利用辣根過氧化物酶、化學(xué)發(fā)光試劑，進行蛋白質(zhì)免疫印跡檢測；

步驟（2）：洗去步驟（1）已使用的蛋白質(zhì)免疫印跡膜上的化學(xué)發(fā)光試劑；

步驟（3）：將步驟（2）洗去化學(xué)發(fā)光試劑的蛋白質(zhì)免疫印跡膜加入到權(quán)利要求1-3任一項所述的蛋白質(zhì)免疫印跡膜再生液中進行震蕩孵育；

步驟（4）：取出步驟（2）中的膜，用雙蒸水和/或TBST溶液洗滌，得到辣根過氧化物酶已經(jīng)失活的膜;

步驟（5）：采用步驟（4）得到辣根過氧化物酶已經(jīng)失活的膜，利用辣根過氧化物酶、化學(xué)發(fā)光試劑，進行蛋白質(zhì)免疫印跡檢測。

作為優(yōu)選，步驟（5）中所檢測的蛋白質(zhì)與步驟（1）所檢測的蛋白質(zhì)為非同種蛋白質(zhì)。

作為優(yōu)選，步驟（1）-步驟（4）重復(fù)循環(huán)至少兩次，在后所檢測的蛋白與在先所檢測的蛋白均為非同種蛋白。

所述蛋白質(zhì)免疫印跡膜再生液的配方中包括巴豆酸，所述巴豆酸的濃度為5-20%質(zhì)量比，通過巴豆酸滅活二抗標(biāo)記的辣根過氧化物酶(HRP)來實現(xiàn)蛋白質(zhì)免疫印跡膜的再次使用，所述再生液及蛋白質(zhì)免疫印跡膜再生液的使用方法不影響抗體與印跡上的抗原之間的結(jié)合以及印跡膜上抗原含量的變化，并可以重復(fù)使用，并且在NC膜的處理中具有優(yōu)勢：使用CA 預(yù)先孵育不僅可以穩(wěn)定 NC 膜結(jié)合蛋白質(zhì)，而且可以提高 NC 膜檢測的靈敏度。

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