美國 Zeta life-Advanced RNA 轉(zhuǎn)染試劑 2025 年全新升級 產(chǎn)品概述
美國 Zeta life-Advanced RNA 轉(zhuǎn)染試劑 2025 年全新升級
產(chǎn)品概述
Advanced RNA 轉(zhuǎn)染試劑,產(chǎn)品貨號為 AD300025,以下是其詳細的操作說明書。
一、試劑盒組分
Advanced RNA 轉(zhuǎn)染試劑:貨號 AD30,是實現(xiàn)高效 RNA 轉(zhuǎn)染的關(guān)鍵成分。
稀釋液:貨號 X-DS,用于稀釋轉(zhuǎn)染試劑,以確保其在轉(zhuǎn)染過程中發(fā)揮最佳性能。
二、注意事項
培養(yǎng)基使用:轉(zhuǎn)染復合物可直接轉(zhuǎn)入含有血清的培養(yǎng)基中進行轉(zhuǎn)染操作。轉(zhuǎn)染 24 小時后需更換培養(yǎng)基,48 小時后收集細胞用于后續(xù)實驗。特別注意,轉(zhuǎn)染所用的含血清培養(yǎng)基中不應含有雙抗,以免影響轉(zhuǎn)染效果。
siRNA 純度:使用高純度的 siRNA 對提高轉(zhuǎn)染效率至關(guān)重要。高純度的 siRNA 能夠減少雜質(zhì)干擾,確保轉(zhuǎn)染過程順利進行。
試劑用量:建議轉(zhuǎn)染試劑的用量為 0.1 μL/pmol siRNA,以達到理想的轉(zhuǎn)染效果。
siRNA 濃度:siRNA 的實驗濃度推薦為 40 nM,在此濃度下能夠有效實現(xiàn)基因沉默等實驗目的。
儲存條件:本產(chǎn)品應儲存于 4°C 環(huán)境中,嚴禁凍融,以保證其活性和穩(wěn)定性。產(chǎn)品的有效期為 1 年,請在有效期內(nèi)使用。
三、簡易操作說明
核酸準備要求:實驗中使用的 RNA 濃度需達到 20 uM /L,確保 RNA 質(zhì)量和濃度符合實驗要求。
操作流程
細胞接種:提前 1 天進行細胞接種,確保在轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度達到 70-90%,為轉(zhuǎn)染提供良好的細胞狀態(tài)。
稀釋轉(zhuǎn)染試劑:根據(jù)參考用量,使用稀釋液(貨號 X-DS)對 Advanced RNA® 轉(zhuǎn)染試劑進行稀釋,確保轉(zhuǎn)染試劑的濃度合適。
加入 siRNA 溶液:向稀釋后的轉(zhuǎn)染試劑中加入 siRNA 溶液,并充分混勻,使轉(zhuǎn)染試劑與 siRNA 充分結(jié)合。
孵育形成復合物:將 siRNA 與轉(zhuǎn)染試劑的混合液在室溫下孵育 20-30 分鐘,形成穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染復合物。若希望達到更佳的轉(zhuǎn)染效果,也可在 37℃下進行孵育。
加入復合物到細胞中:根據(jù)參考用量,將孵育好的復合物加入到細胞中,確保復合物能夠有效進入細胞。
結(jié)果分析:細胞繼續(xù)培養(yǎng) 2-3 天后,對轉(zhuǎn)染效果進行檢測和分析,評估轉(zhuǎn)染的效率和效果。
四、以細胞培養(yǎng)板為例的轉(zhuǎn)染試劑及 RNA 用量梯度說明
培養(yǎng)器皿 | siRNA 濃度 | 每孔體積 | 轉(zhuǎn)染試劑 | 轉(zhuǎn)染試劑稀釋液 | 20μM siRNA | 培養(yǎng)基 |
96-well | 100 nM | 100 μL | 1 μL | 10 μL | 0.5 μL | 88.5 μL |
96-well | 40 nM | 100 μL | 0.4 μL | 10 μL | 0.2 μL | 89.4 μL |
96-well | 20 nM | 100 μL | 0.2 μL | 10 μL | 0.1 μL | 89.7 μL |
96-well | 10 nM | 100 μL | 0.1 μL | 10 μL | 0.05 μL | 89.85 μL |
24-well | 100 nM | 500 μL | 5 μL | 50 μL | 2.5 μL | 442.5 μL |
24-well | 40 nM | 500 μL | 2 μL | 50 μL | 1 μL | 447 μL |
24-well | 20 nM | 500 μL | 1 μL | 50 μL | 0.5 μL | 448.5 μL |
24-well | 10 nM | 500 μL | 0.5 μL | 50 μL | 0.25 μL | 449.25 μL |
12-well | 100 nM | 1 mL | 10 μL | 100 μL | 5 μL | 885 μL |
12-well | 40 nM | 1 mL | 4 μL | 100 μL | 2 μL | 894 μL |
12-well | 20 nM | 1 mL | 2 μL | 100 μL | 1 μL | 897 μL |
12-well | 10 nM | 1 mL | 1 μL | 100 μL | 0.5 μL | 898.5 μL |
6-well | 100 nM | 2 mL | 20 μL | 200 μL | 10 μL | 1770 μL |
6-well | 40 nM | 2 mL | 8 μL | 200 μL | 4 μL | 1788 μL |
6-well | 20 nM | 2 mL | 4 μL | 200 μL | 2 μL | 1794 μL |
6-well | 10 nM | 2 mL | 2 μL | 200 μL | 1 μL | 1797 μL |
本產(chǎn)品僅用于科研用途,嚴禁用于臨床診斷或治療等其他用途。
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