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上新 | T4 RNA Ligase 2，環(huán)狀RNA研究核心酶原料

來源：翌圣生物科技（上海）股份有限公司   2025年02月25日 08:48  
近年來，隨著RNA研究的不斷深入，線性RNA分子在生物學(xué)研究和治療開發(fā)領(lǐng)域展現(xiàn)出廣泛的應(yīng)用潛力，例如mRNA疫苗。然而，長鏈線性RNA較短的半衰期限制了其有效性。環(huán)狀RNA (circRNA)是一類單鏈閉合的環(huán)狀RNA分子，與線性mRNA相比，circRNA具有穩(wěn)定性高、免疫原性低、表達(dá)持久等優(yōu)勢，已經(jīng)成為下一代RNA療法賽道的新秀。circRNA體外環(huán)化技術(shù)是研究的關(guān)鍵，目前，RNA的體外環(huán)化主要通過化學(xué)合成和酶促連接（分為T4連接酶法和核酶法）兩種方法實(shí)現(xiàn)。

 

在眾多技術(shù)路線中，基于T4連接酶法的技術(shù)路線備受關(guān)注。該技術(shù)路線主要涉及到T4 DNA Ligase 1、T4 RNA Ligase 1以及T4 RNA Ligase 2這幾種關(guān)鍵酶。值得注意的是，不同的T4連接酶在功能方面存在著顯著的差異，這種差異決定了它們各自適用于不同結(jié)構(gòu)的RNA連接任務(wù)。其中，T4 RNA Ligase 2在對雙鏈RNA缺口進(jìn)行連接時(shí)，展現(xiàn)出了高的連接效率。

圖1. T4連接酶作用原理比較[1]

 

T4 RNA Ligase 2，是一種依賴于ATP的雙鏈RNA連接酶（double-strand RNA ligase, dsRNA Ligase），具有RNA鏈分子間和分子內(nèi)連接活性，可連接雙鏈RNA中的切刻，也可用于連接雙鏈結(jié)構(gòu)中RNA 3′羥基與DNA 5′磷酸基的切刻。與T4 RNA Ligase 1相比，該酶對雙鏈RNA切刻的連接活性要明顯高于對單鏈RNA的末端連接。

 

T4 RNA Ligase 2能夠通過三步反應(yīng)將相鄰的3′羥基與5′磷酸多核苷酸連接起來，其機(jī)理如下：

①連接酶與ATP反應(yīng)形成酶-AMP復(fù)合中間體；

② AMP脫離酶-AMP復(fù)合體，與RNA的5’-磷酸結(jié)合，形成5’端腺苷化的RNA；

③ 5’端腺苷化的RNA與3’-OH連接形成磷酸二酯鍵，釋放AMP。

 

圖2.T4連接酶結(jié)構(gòu)與作用機(jī)理[2][3]

 

基于T4 RNA Ligase 2在RNA連接中的性能，翌圣生物隆重推出T4 RNA Ligase 2 (Cat#14652)，為您的分子生物學(xué)研究提供更高效、更穩(wěn)定的工具。

 

為回饋廣大用戶的支持與厚愛，現(xiàn)特別推出5個(gè)免費(fèi)試用名額等你來搶！只需掃描活動(dòng)詳情下方二維碼，聯(lián)系工作人員，即可輕松領(lǐng)??！機(jī)會(huì)難得，先到先得哦！

 

產(chǎn)品名稱

貨號

規(guī)格

目錄價(jià)

活動(dòng)價(jià)

T4 RNA Ligase 2

14652ES80

1000 U

535元

0元

 

 

活動(dòng)細(xì)則：

1、活動(dòng)時(shí)間：2025年2月12日-2025年2月28日；

2、活動(dòng)名額有限，每位客戶限一套。

 

 

翌圣T4 RNA Ligase 2(Cat#14652) 性能展示

 
01

連接活性強(qiáng)

將Yeasen和進(jìn)口Supplier N*的T4 RNA Ligase 2按照不同投入量加入體系中對dsRNA底物進(jìn)行連接，結(jié)果顯示其能有效連接dsRNA底物，連接效果與進(jìn)口Supplier N*相當(dāng)。

 

圖3. T4 RNA Ligase 2連接效果驗(yàn)證
注：20 μL反應(yīng)體系中包含終濃度為20 μM的dsRNA連接底物

 

02

無核酸外切酶、切口酶、RNase酶殘留

將100 U T4 RNA Ligase 2分別與核酸底物一起孵育，瓊脂糖凝膠電泳比較譜帶變化。結(jié)果顯示翌圣3個(gè)批次的T4 RNA Ligase 2均無核酸外切酶、切口酶、RNase殘留。

 

圖4. T4 RNA Ligase 2核酸外切酶、切口酶、RNase殘留檢測結(jié)果

 

 

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產(chǎn)品定位

產(chǎn)品名稱

貨號

質(zhì)粒線性化

BspQI GMP-grade

10664ES

Bsa I GMP-grade

10661ES

模板去除

DNase I GMP-grade

10611ES

體外轉(zhuǎn)錄

T7 RNA Polymerase GMP-grade

10625ES

Pyrophosphatase,Inorganic GMP-grade

10620ES

Murine RNase inhibitor GMP-grade

10621ES

mRNA Vaccinia Capping Enzyme GMP-grade

10614ES

mRNA Cap 2'-O-Methyltransferase GMP-grade

10612ES

RNA環(huán)化

T4 RNA Ligase 1

14651ES

T4 RNA Ligase 2

14652ES

RNA純化

RNase R GMP-grade

14615ES

 

參考文獻(xiàn):

[1]Obi P, Chen Y G. The design and synthesis of circular RNAs[J]. Methods, 2021, 196: 85-103.
[2]Easey A. Synthetic Biology Methods to Optimise T4 RNA Ligase Activities[D]. University of East Anglia, 2018.
[3] Viollet S, Fuchs R T, Munafo D B, et al. T4 RNA ligase 2 truncated active site mutants: improved tools for RNA analysis[J]. BMC biotechnology, 2011, 11: 1-14.

 



 


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