摘要本應(yīng)用簡(jiǎn)報(bào)介紹了一種采用液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)測(cè)定化妝品中禁用物質(zhì)秋水仙堿和秋水仙胺含量的方法。該方法操作簡(jiǎn)便、靈敏度高；在 0.1–200 µg/L 的濃度范圍內(nèi)表現(xiàn)出良好的線性；在化妝品空白基質(zhì)中的兩種加標(biāo)濃度下，目標(biāo)化合物的回收率在 93%–111% 之間，且六次平行測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在 1.5%–7.3% 之間，表現(xiàn)出良好的準(zhǔn)確度和精密度。該方法適用于化妝品中秋水仙堿和秋水仙胺的檢測(cè)。

前言化妝品作為美容和個(gè)人護(hù)理產(chǎn)品，直接影響消費(fèi)者的皮膚健康和整體福祉。近年來，隨著消費(fèi)者對(duì)安全、健康的日益關(guān)注，越來越多化妝品中開始添加純植物提取的中草藥成分，以實(shí)現(xiàn)天然保濕、抗炎等護(hù)膚目的。但是，所添加的中草藥成分在產(chǎn)生功效的同時(shí)，也有可能引入具有毒性的生物堿類化合物，如秋水仙堿及其鹽類。如果消費(fèi)者長期使用含有此類生物堿類化合物的化妝品，會(huì)損傷肝、腎和骨髓等器官，引起嘔吐、腹瀉、腹痛、胃腸等不良反應(yīng)[1]。為保障消費(fèi)者的健康和權(quán)益，監(jiān)管機(jī)構(gòu)嚴(yán)禁化妝品中使用秋水仙堿及其衍生物秋水仙胺。目前，針對(duì)化妝品中秋水仙堿和秋水仙胺的檢測(cè)方法包括高效液相色譜法 (HPLC)、氣質(zhì)聯(lián)用法 (GC-MS) 等。其中，HPLC 法操作簡(jiǎn)單，但選擇性差、靈敏度有限，不適用于痕量檢測(cè)；GC-MS 法選擇性高，但需要對(duì)樣品進(jìn)行衍生，操作復(fù)雜，重現(xiàn)性差。相比之下，液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用法 (LC-MS/MS) 作為一種高效、靈敏且可靠的分析技術(shù)，正逐漸成為化妝品中秋水仙堿和秋水仙胺的檢測(cè)方法[2]。本文介紹了一種采用 Agilent 1290 Infinity II 液相色譜/6470 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)檢測(cè)化妝品中秋水仙堿和秋水仙胺的方法。該方法簡(jiǎn)單、靈敏度高且準(zhǔn)確可靠，適用于準(zhǔn)確測(cè)定化妝品中的痕量秋水仙堿和秋水仙胺。

實(shí)驗(yàn)部分試劑和樣品實(shí)驗(yàn)用甲醇、乙腈、正己烷、甲酸均為色譜純，購自美國 Fisher公司；乙酸銨溶液購自德國 Merck 公司；實(shí)驗(yàn)用水為經(jīng) Milli-Q 系統(tǒng)凈化的超純水（電阻率 18.2 MΩ）；秋水仙堿和秋水仙胺標(biāo)準(zhǔn)品購自天津阿爾塔科技公司；實(shí)驗(yàn)用化妝品樣品購自北京市場(chǎng)。儀器和設(shè)備采用 Agilent 1290 Infinity II 液相色譜/6470 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)；以及渦旋混勻器（德國 IKA 公司）、KQ-500B 型超聲儀（昆山市超聲器有限公司）、TD5A-WS 離心機(jī)（湖南湘儀離心機(jī)儀器有限公司）和 Milli-Q 超純水裝置（德國 Merck 公司）

樣品前處理稱取 1.0 g 樣品，準(zhǔn)確加入 10 mL 用正己烷飽和的甲醇乙腈 (1/1)溶液，渦旋混勻后，超聲提取 15 min；然后以 9500 r/min 離心5 min，取上清液 5 mL 于 10 mL 容量瓶中，用水定容至刻度，混勻；取 5 mL 加入 15 mL 離心管中，加入 5 mL 正己烷，渦旋混合；然后以 9500 r/min 離心 5 min，棄去上層，并將下層清液用過濾膜過濾后待測(cè)[3]。

液相色譜條件色譜柱： Agilent Eclipse Plus C18, 2.1 × 100 mm,1.8 µm（部件號(hào) 959758-902）柱溫： 40 °C進(jìn)樣量： 2 µL流動(dòng)相： A) 含 0.1% 甲酸和 5 mmol/L 乙酸銨的水溶液；B) 甲醇流速： 0.3 mL/min梯度程序： 時(shí)間 (min) B (%) 0 10 5 100 7 100后運(yùn)行時(shí)間：3 min

質(zhì)譜條件離子模式： ESI，正離子模式干燥氣溫度： 300 °C干燥氣流速： 8 L/min鞘氣溫度： 350 °C鞘氣流速： 11 L/min霧化器壓力： 25 psi毛細(xì)管電壓： 3000 V噴嘴電壓： 500 V多反應(yīng)監(jiān)測(cè) (MRM) 采集參數(shù)：見表 1

質(zhì)譜與色譜條件的優(yōu)化秋水仙堿和秋水仙素屬于生物堿類化合物，在電噴霧離子源正離子模式下容易產(chǎn)生 [M+H]+ 準(zhǔn)分子離子峰。采用濃度為 1 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)溶液，對(duì)質(zhì)譜離子源和多反應(yīng)監(jiān)測(cè) (MRM) 離子對(duì)條件進(jìn)行優(yōu)化。優(yōu)化后的 MRM 參數(shù)如表 1 所列。確定質(zhì)譜條件后，選取色譜柱 Eclipse Plus C18 和 PoroshellEC-C18，考察以水/甲醇和水/乙腈作為流動(dòng)相、以甲酸和乙酸銨作為添加劑時(shí)的分離效果。綜合考慮分離度、峰形和分析效率等因素，最終選取 Eclipse Plus C18 色譜柱和含 0.1% 甲酸和5 mmol/L 乙酸銨的水溶液/甲醇流動(dòng)相體系。經(jīng)梯度優(yōu)化后，所得秋水仙堿和秋水仙胺標(biāo)樣 (10.0 µg/L) 的 MRM 提取色譜圖如圖 1 所示。從圖中可以看出，秋水仙堿和秋水仙胺得到有效分離，峰形良好，且不受基質(zhì)明顯干擾。

線性范圍采用外標(biāo)法進(jìn)行定量，在 0.005–200 µg/L 的濃度范圍內(nèi)考察方法線性。結(jié)果如表 2 所示。從表中可以看出，秋水仙堿和秋水仙胺分別在 0.01–100 µg/L 和 0.01–200 µg/L 的濃度范圍內(nèi)獲得了良好的線性響應(yīng)，線性相關(guān)系數(shù) (R2) 高于 0.997，表明該方法具有較寬的線性范圍。

方法準(zhǔn)確度和精密度取空白乳液化妝品和膏狀化妝品，分別以 2 µg/kg 和 20 µg/kg的濃度添加秋水仙堿和秋水仙胺，并且在每個(gè)加標(biāo)水平下重復(fù)測(cè)定 6 次，對(duì)方法準(zhǔn)確度和精密度進(jìn)行評(píng)估。結(jié)果如表 3 所列。從表中可以看出，在低加標(biāo)濃度下，目標(biāo)化合物的回收率在93.2%–110.7% 之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在 4.3%–7.3% 之間；在高加標(biāo)濃度下，目標(biāo)化合物的回收率在 93.5%–102.1% 之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在 1.5%–3.2% 之間，表明該方法具有良好的準(zhǔn)確度和精密度

實(shí)際樣品分析使用所開發(fā)的方法對(duì)購自北京市場(chǎng)的 6 種不同品牌的化妝品（包括祛痘消炎膏霜類 3 個(gè)、清潔護(hù)膚乳液類 3 個(gè)）進(jìn)行分析，在所有樣品中均未檢出秋水仙堿和秋水仙胺。

結(jié)論本文介紹了一種采用液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定化妝品中秋水仙堿和秋水仙胺的方法。該方法操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、線性范圍寬，且具有優(yōu)異的準(zhǔn)確度和精密度，適用于測(cè)定不同類型化妝品中的痕量秋水仙堿和秋水仙胺。