?一、核心處理流程?
?1. 樣本類型與預(yù)處理?
?樣本類型 | ?處理方法(步驟) | ?關(guān)鍵注意事項(xiàng) |
?血清 | 全血靜置30分鐘(室溫),離心2000×g 10分鐘(4℃),取上清 | 避免溶血;避免反復(fù)凍融(最多3次) |
?血漿? | 抗凝全血(EDTA/肝素)離心3000×g 15分鐘(4℃),取上層血漿 | 抗凝劑需與試劑盒兼容(詳見說明書) |
?細(xì)胞上清 | 直接離心1000×g 5分鐘去除細(xì)胞碎片,上清分裝保存 | 避免細(xì)胞裂解污染(可能干擾檢測) |
?組織勻漿 | 組織剪碎后液氮研磨,按比例加入PBS(含蛋白酶抑制劑)勻漿,離心12000×g 20分鐘取上清 | 控制總蛋白濃度(建議1-10 mg/mL) |
?尿液/唾液 | 離心2000×g 10分鐘去除沉淀,上清加入0.1% BSA穩(wěn)定 | 檢測前需稀釋(避免高鹽/酸堿干擾) |
?
2. 保存與運(yùn)輸?
短期保存?:4℃冷藏(≤24小時(shí)),避免微生物滋生。
長期保存?:-80℃分裝凍存(避免反復(fù)凍融),使用凍存管標(biāo)注批次/日期。
運(yùn)輸?:干冰(-80℃)或冷鏈箱(2-8℃),避免劇烈震蕩。
?二、質(zhì)量控制要點(diǎn)?
1.?樣本稀釋?
按試劑盒要求梯度稀釋(常用稀釋液:PBS+1% BSA)。
避免基質(zhì)效應(yīng)?:高脂血/溶血樣本需超速離心或過濾。
2.?干擾物處理?
去除內(nèi)源性酶?:過氧化氫酶(HRP系統(tǒng))或堿性磷酸酶(AP系統(tǒng))抑制劑。
去除類風(fēng)濕因子?:添加IgG阻斷劑(針對血液樣本)。
3.?質(zhì)控樣本?
陽性/陰性對照?:每板至少設(shè)置2孔。
標(biāo)準(zhǔn)曲線?:覆蓋檢測范圍(建議R2≥0.99)。
三、常見問題與解決方案
?問題 | ?可能原因 | ?解決方案 |
?OD值異常高/低 | 樣本過度稀釋/未稀釋 | 預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化稀釋比例,檢查標(biāo)準(zhǔn)曲線
|
?板內(nèi)重復(fù)性差 | 離心不徹-底或氣泡干擾 | 離心后靜置5分鐘,加樣時(shí)避免產(chǎn)生氣泡
|
?非特異性顯色 | 交叉反應(yīng)或封閉不充分 | 增加封閉時(shí)間(≥1小時(shí)),使用專用封閉劑 |
?提示?:不同品牌試劑盒可能存在差異,務(wù)必以說明書為準(zhǔn)!
針對以上技術(shù)資訊內(nèi)容,如果您有不太清楚或者想了解更多信息(包括基本信息/技術(shù)資料/解決方案),都可以隨時(shí)咨詢上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司業(yè)務(wù)員。我司力于提供生命科學(xué)領(lǐng)域的技術(shù)服務(wù),提供全-面實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù),為廣大科研工作者大大節(jié)省了重復(fù)勞動的時(shí)間和精力,我們有過硬的技術(shù)咨詢和完善的售后服務(wù),為您解決后顧之憂。
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