PDE5A1實(shí)驗(yàn)試劑盒是一種基于熒光偏振（FP）的均相96孔實(shí)驗(yàn)試劑盒，專(zhuān)為篩選和分析PDE5A1（磷酸二酯酶5A1）抑制劑而設(shè)計(jì)。該實(shí)驗(yàn)利用了一種特異性的熒光磷酸結(jié)合納米顆粒。試劑盒包含足夠量的純化重組PDE5A1、熒光探針、PDE實(shí)驗(yàn)緩沖液、結(jié)合劑和稀釋液，可進(jìn)行100次反應(yīng)。

艾美捷PDE5A1檢測(cè)試劑盒：

貨號(hào)：BPQ-60350

別名：cGMP特異性3',5'-環(huán)狀磷酸二酯酶，cGMP結(jié)合的cGMP特異性磷酸二酯酶，CGB-PDE，PDE5A，PDE5，PDE5-A1，PDE  

儲(chǔ)存/穩(wěn)定性： 按照說(shuō)明儲(chǔ)存時(shí)，該實(shí)驗(yàn)試劑盒在收到之日起6個(gè)月內(nèi)可達(dá)到最佳性能。  

實(shí)驗(yàn)試劑盒形式：熒光偏振  

物種：人  

運(yùn)輸溫度：-80°C  

科學(xué)分類(lèi)：磷酸二酯酶（PDE）  

監(jiān)管狀態(tài)：僅限研究使用。

應(yīng)用：用于研究酶動(dòng)力學(xué)和篩選小分子抑制劑，適用于高通量篩選（HTS）應(yīng)用中的藥物發(fā)現(xiàn)。

提供材料：  

目錄編號(hào) | 名稱(chēng) | 數(shù)量 | 儲(chǔ)存條件  

60050 | PDE5A1* | >1 µg | -80°C  

60201 | FAM-Cyclic-3′,5′-GMP | 2 x 1.2 nmol | -80°C  

60393 | PDE實(shí)驗(yàn)緩沖液（未w全配方） | 25 ml | -20°C  

60390 | PDE結(jié)合劑 | 100 µl | 4°C  

60392 | 結(jié)合劑稀釋液（cGMP） | 10 ml | 4°C  

0.5 M DTT | 200 µl | -20°C  

79685 | 低吸附性黑色96孔板 | 1個(gè) | 室溫  

蛋白質(zhì)的濃度因批次而異，具體濃度將標(biāo)注在含有蛋白質(zhì)的管上。  

FAM-Cyclic-3′,5′-GMP以粉末形式提供。每支安瓿在使用前需用400 µl w全配方的PDE實(shí)驗(yàn)緩沖液溶解。

所需材料（但未提供）：  

可調(diào)節(jié)微量移液器及無(wú)菌吸頭  

旋轉(zhuǎn)或搖床平臺(tái)  

能夠測(cè)量熒光偏振的熒光微孔板讀數(shù)儀（激發(fā)波長(zhǎng)λex=470 nm（5 nm帶寬），發(fā)射波長(zhǎng)λem=528 nm（10 nm帶寬））

注意事項(xiàng)：  

實(shí)驗(yàn)中DMSO的最終濃度不應(yīng)超過(guò)1%。  

具有λex=470 nm激發(fā)和λem=528 nm發(fā)射的熒光化合物可能會(huì)干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。  

建議單獨(dú)測(cè)試化合物，以確定其是否會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生潛在干擾。

結(jié)果計(jì)算：  

熒光偏振是衡量熒光探針在激發(fā)和發(fā)射之間發(fā)生分子旋轉(zhuǎn)量的指標(biāo)。它可以通過(guò)測(cè)量探針相對(duì)于偏振激發(fā)光方向發(fā)出的垂直（I⊥）和平行（I‖）熒光強(qiáng)度值來(lái)確定。  

圖：熒光偏振原理  

A. 當(dāng)熒光標(biāo)記的探針與較大的蛋白結(jié)合時(shí)，會(huì)形成一個(gè)大分子量的復(fù)合物，該復(fù)合物的旋轉(zhuǎn)能力較弱。在這種狀態(tài)下，探針的旋轉(zhuǎn)擴(kuò)散減少，因此當(dāng)它被偏振光激發(fā)時(shí)，仍會(huì)發(fā)出高度偏振的光，其偏振度與分子旋轉(zhuǎn)速率成反比。  

B. 在存在與蛋白有親和力的化合物時(shí)，熒光探針保持在溶液中并能夠快速旋轉(zhuǎn)。未結(jié)合的探針具有較高的旋轉(zhuǎn)擴(kuò)散，因此當(dāng)它被偏振光激發(fā)時(shí)，會(huì)發(fā)出的光可以在垂直和平行濾光片中被檢測(cè)到。

文獻(xiàn)參考：

Ahmed W., et al., 2021 Biomedicine & Pharmacotherapy 134:111128.

Huang W., et al., 2020 Nat Commun 11:3191.