組蛋白H3上賴氨酸27的三甲基化（H3K27me3）與植物和動(dòng)物發(fā)育及疾病過(guò)程中的轉(zhuǎn)錄抑制密切相關(guān)。這種修飾由多梳抑制復(fù)合體2（PRC2，由EZH2甲基轉(zhuǎn)移酶催化）維持，并可通過(guò)賴氨酸去甲基化酶（如JMJD3）去除。  

以兔為宿主制備的針對(duì)組蛋白H3在賴氨酸27位點(diǎn)三甲基化（H3K27me3）的多克隆抗體，使用KLH偶聯(lián)的合成肽作為免疫原。 

作為BPS Bioscience在中國(guó)的區(qū)域總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦BPS Bioscience銷售產(chǎn)品Anti-H3K27me3多克隆抗體。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

Anti-H3K27me3多克隆抗體：

克隆性：多克隆  

宿主物種/表達(dá)系統(tǒng)：兔  

純化方法：親和純化  

形式：水溶液  

配方：含有0.05%疊氮化物和0.05% ProClin 300的PBS緩沖液  

濃度：50 ?g/34 ?l  

免疫原：合成肽  

儲(chǔ)存/穩(wěn)定性 

在-80°C下可保存長(zhǎng)達(dá)2年。分裝以避免反復(fù)凍融。分裝后可在-20°C下保存至少一個(gè)月。  

染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）實(shí)驗(yàn)結(jié)果 

使用針對(duì)H3K27me3的抗體（產(chǎn)品編號(hào)25244）和優(yōu)化的qPCR引物組合，在人HeLa細(xì)胞中進(jìn)行ChIP實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)使用了100萬(wàn)細(xì)胞的剪切染色質(zhì)?？贵w用量梯度為1、2、5和10 ?g/次ChIP實(shí)驗(yàn)，并進(jìn)行了分析。以2 ?g/IP的IgG作為陰性免疫沉淀對(duì)照。定量PCR使用了活性基因EIF4A2和GAPDH的啟動(dòng)子引物作為陰性對(duì)照，以及非活性基因MYT1和TSH2B的編碼區(qū)引物作為陽(yáng)性對(duì)照。圖1顯示了回收率，以輸入量的百分比表示（免疫沉淀DNA與輸入DNA的相對(duì)量，經(jīng)qPCR分析后得出）。這些結(jié)果與H3K27me3主要存在于非活性基因中的觀察結(jié)果一致。  

ChIP-seq實(shí)驗(yàn)結(jié)果 

使用1 ?g針對(duì)H3K27me3的抗體（產(chǎn)品編號(hào)25244），在100萬(wàn)HeLaS3細(xì)胞的剪切染色質(zhì)上進(jìn)行ChIP實(shí)驗(yàn)。隨后，免疫沉淀的DNA在Illumina HiSeq測(cè)序儀上進(jìn)行分析。文庫(kù)制備、簇生成和測(cè)序均按照制造商說(shuō)明進(jìn)行。51 bp的標(biāo)簽通過(guò)BWA算法與人類基因組比對(duì)。圖2顯示了在染色體6上圍繞TSH2B基因（箭頭所示；圖2A）、染色體20上圍繞MYT1基因（圖2B）以及染色體2和3（圖2C和D）的基因組區(qū)域的富集情況。  

抗體滴度測(cè)定 

為了測(cè)定抗體滴度，使用針對(duì)H3K27me3的抗體（產(chǎn)品編號(hào)25244）進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)，抗體進(jìn)行梯度稀釋。使用的抗原是含有目標(biāo)組蛋白修飾的肽段。通過(guò)繪制吸光度與抗體稀釋度的關(guān)系圖（圖3），估計(jì)抗體的滴度為1:3,500。  

交叉反應(yīng)性測(cè)試 

使用針對(duì)H3K27me3的抗體（產(chǎn)品編號(hào)25244）進(jìn)行點(diǎn)雜交分析，測(cè)試其與其他修飾的組蛋白H3和H4肽段以及未修飾的H3K27序列的交叉反應(yīng)性。將含有相應(yīng)組蛋白修飾的肽段（100至0.2 pmol）點(diǎn)在膜上，抗體稀釋度為1:5,000。圖4顯示抗體對(duì)目標(biāo)修飾具有高特異性。請(qǐng)注意，抗體也能識(shí)別S28磷酸化的修飾。  

Western Blot分析 

使用針對(duì)H3K27me3的抗體（產(chǎn)品編號(hào)25244），對(duì)HeLa細(xì)胞的全細(xì)胞裂解物（25 ?g，泳道1）和組蛋白提取物（15 ?g，泳道2）進(jìn)行Western Blot分析，同時(shí)分析1 ?g的重組組蛋白H2A、H2B、H3和H4（分別對(duì)應(yīng)泳道3、4、5和6）?？贵w在含有5%脫脂奶粉的TBS-Tween中稀釋1:500。右側(cè)標(biāo)記了目標(biāo)蛋白的位置，左側(cè)顯示了分子量標(biāo)記（單位：kDa）。  

免疫熒光分析 

小鼠NIH3T3細(xì)胞用針對(duì)H3K27me3的抗體（產(chǎn)品編號(hào)25244）和DAPI進(jìn)行染色。細(xì)胞用4%甲醛固定10分鐘，并用含有5%正常山羊血清和1% BSA的PBS/TX-100進(jìn)行封閉。細(xì)胞用H3K27me3抗體（左側(cè)）在封閉液中稀釋1:200進(jìn)行免疫熒光標(biāo)記，隨后用與Alexa488偶聯(lián)的抗兔抗體進(jìn)行二抗標(biāo)記。中間圖顯示了DAPI對(duì)細(xì)胞核的染色。右側(cè)圖顯示了兩種染色的合并圖像。  

應(yīng)用 

ChIP/ChIP-seq（1 ?g/ChIP）  

ELISA（1:200）  

點(diǎn)雜交（1:5000）  

Western Blot（1:500）  

免疫熒光（1:200）  

運(yùn)輸溫度：-20°C或-80°C  

物種反應(yīng)性：人  

備注：每次免疫沉淀的抗體優(yōu)良用量應(yīng)由終端用戶確定。建議測(cè)試1 - 5 ?g/次。  

注意事項(xiàng)：避免反復(fù)凍融。  

科學(xué)分類：抗體  

監(jiān)管狀態(tài)：僅限研究使用

BPS Bioscience是一家通過(guò)ISO 9001:2015認(rèn)證的生命科學(xué)領(lǐng)域的供應(yīng)商，公司一直致力于開(kāi)發(fā)藥物研發(fā)領(lǐng)域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創(chuàng)立，從創(chuàng)立至今一直致力于提供藥物研發(fā)領(lǐng)域的創(chuàng)新解決方案，以推動(dòng)新的藥物發(fā)現(xiàn)a。公司主要關(guān)注的領(lǐng)域包括免疫療法、表觀遺傳學(xué)、CRISPR、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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Anti-H3K27me3多克隆抗體Anti-H3K27me3多克隆抗體