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全自動(dòng)外泌體熒光檢測(cè)分析
美國(guó)NanoView公司所開發(fā)的全自動(dòng)外泌體熒光檢測(cè)分析是款無(wú)需純化的、全自動(dòng)的可對(duì)單個(gè)外泌體進(jìn)行表征分析的全新設(shè)備。該設(shè)備能夠提供外泌體表征信息，包括外泌體粒徑大小、計(jì)數(shù)、分布、攜帶蛋白表達(dá)、生物標(biāo)志物（CD9，CD81，CD63等）共定位等。操作簡(jiǎn)單，結(jié)果可靠。經(jīng)推出，便引起了外泌體域科研工作者的廣泛關(guān)注，短短兩年時(shí)間已有50多個(gè)實(shí)驗(yàn)室采用該技術(shù)，發(fā)表重要文獻(xiàn)近百篇。
基本原理是種基于異性免疫捕獲技術(shù)，允許研究者直接分析定群體的外泌體或外囊泡。通過(guò)配套的試劑盒，客戶次性能夠分析多達(dá)9個(gè)不同的樣本，大大節(jié)省了時(shí)間和經(jīng)濟(jì)成本。兼容各種生物樣本，除了純化的外泌體之外，對(duì)于血液、尿液、惡性腫瘤、腹水中的外泌體也可直接檢測(cè)分析，大大拓展了研究范圍。
應(yīng)用方向及主要征
生物標(biāo)記物共定位 可量化4種標(biāo)記物的表達(dá)情況 |
計(jì)數(shù)分析 直接從樣品中計(jì)算抗原陽(yáng)性外泌體的數(shù)量，無(wú)需提純 |
粒徑分析 高精度統(tǒng)計(jì)外泌體的顆粒大小及分布 |
檢測(cè)外泌體內(nèi)容物 使用ExoView Cargo試劑盒可探測(cè)外泌體內(nèi)部核酸的裝載情況，分析裝載率 |
熒光檢測(cè) 具備3個(gè)熒光通道，能夠探測(cè)單個(gè)蛋白的結(jié)合 |
線性工作流程 9個(gè)樣品的全自動(dòng)分析 |
無(wú)須純化 無(wú)需擔(dān)心純化帶來(lái)的誤差，測(cè)量樣品間的表征和表達(dá)信息的差異 |
多重樣本分析 可使用6種表面標(biāo)記物來(lái)篩選外泌體 |
ExoView™ Kit 配置清單:
ExoView™ Tetraspanin Kits | CD9 - 捕獲抗體 CD63 - 捕獲抗體 CD81 - 捕獲抗體 Mouse IgG 陰性對(duì)照 CD9、CD63、CD81三色共標(biāo)記熒光抗體。 |
ExoView™ Tetraspanin Plasma Kits | CD9 - 捕獲抗體 CD63 - 捕獲抗體 CD81 - 捕獲抗體 CD41a - 捕獲抗體 多達(dá)三種定制化捕獲抗體 同種陰性對(duì)照 CD9、CD63、CD81三色共標(biāo)記熒光抗體。 |
ExoView™ Tetraspanin Custom Kits | CD9 - 捕獲抗體 CD63 - 捕獲抗體 CD81 - 捕獲抗體 多達(dá)三種定制化捕獲抗體 同種陰性對(duì)照 CD9、CD63、CD81三色共標(biāo)記熒光抗體。 |
ExoView™ Cargo Kits | 兼容所有ExoView Kit 標(biāo)準(zhǔn) CD9, CD63和CD81 捕獲抗體 Mouse IgG 陰性對(duì)照 ExoView Cargo 試劑 CD9、CD63、CD81三色共標(biāo)記熒光抗體。 Sytenin熒光抗體 |
粒徑分析
全自動(dòng)外泌體熒光檢測(cè)分析能夠?qū)?gt;50 nm的外泌體進(jìn)行全方面的表征，無(wú)論是粒徑尺寸、粒徑分布還是外泌體的亞型均可在次測(cè)試中得到。并且所用來(lái)測(cè)試的樣本無(wú)需進(jìn)行純化，避免因純化帶來(lái)的樣本偏差。
分析不同大小和不同尺度的外泌體亞群，在CD171過(guò)表達(dá)系統(tǒng)中，100 nm以上的外泌體僅表達(dá)了CD171。
量化外泌體亞群
通過(guò)抗體捕獲的模式，外泌體熒光檢測(cè)分析能夠量化含有不同標(biāo)記物的外泌體亞群，并對(duì)不同種群的外泌體進(jìn)行異性計(jì)數(shù)和分析。整個(gè)過(guò)程無(wú)需純化，并且線性范圍可跨越3個(gè)數(shù)量。
TSPAN8陽(yáng)性細(xì)胞外囊泡的稀釋曲線。使用1:3比例的梯度稀釋。用R2 = 0.9986計(jì)算與TSPAN8熒光數(shù)據(jù)的線性擬合。
檢測(cè)外囊泡中的裝載物
MISEV建議在表征外泌體和外囊泡時(shí)，應(yīng)當(dāng)同時(shí)測(cè)量表面和載體蛋白。使用ExoView芯片可穿透外泌體，探測(cè)膜內(nèi)蛋白和載體。并且單次可定量3種表面、管腔蛋白。
檢測(cè)細(xì)胞外泌體內(nèi)的Syntenin。
WT細(xì)胞在未穿膜的條件下幾乎觀測(cè)不到Syntenin的信號(hào)。進(jìn)行穿膜處理后可以觀測(cè)到Syntenin信號(hào)，而KO之后信號(hào)消失
生物標(biāo)志物共定位
外泌體熒光檢測(cè)分析能夠在單個(gè)外泌體樣本上檢測(cè)多達(dá)4種標(biāo)記物，并同時(shí)提供外泌體的其它表征數(shù)據(jù)諸如計(jì)數(shù)、顆粒尺寸統(tǒng)計(jì)等。
無(wú)需純化
外泌體熒光檢測(cè)分析只測(cè)量含有靶標(biāo)抗原的定細(xì)胞外泌體群體。僅需35ul的稀釋樣品，即可直接獲得外泌體的表型、l粒徑和計(jì)數(shù)信息。并且無(wú)需擔(dān)心污染物對(duì)測(cè)試的影響。
無(wú)論純化與否，Exoview均可進(jìn)行分析
發(fā)表文章
2020年已發(fā)表文獻(xiàn)
