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更新時間:2024-08-30 16:56:05瀏覽次數(shù):2665次
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免疫細(xì)胞化學(xué)ICC實(shí)驗(yàn)服務(wù)
神經(jīng)元尼氏染色實(shí)驗(yàn)周期及交付標(biāo)準(zhǔn)
細(xì)胞Hochest凋亡染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)
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免疫細(xì)胞化學(xué)ICC實(shí)驗(yàn)服務(wù)
免疫細(xì)胞化學(xué)是將免疫學(xué)基本原理與細(xì)胞化學(xué)技術(shù)相結(jié)合所建立起來的新技術(shù),根據(jù)抗原與抗體特異性結(jié)合的特點(diǎn),檢測細(xì)胞內(nèi)某種多肽、蛋白質(zhì)及膜表面抗原和受體等大分子物質(zhì)的存在與分布。
一、 免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)的概述
免疫細(xì)胞化學(xué)(immunocytochemistry, ICC)一是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理,通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑(熒光素、酶、屬離子同位素)顯色來確定細(xì)胞內(nèi)抗原的成分(主要是多肽和蛋白質(zhì)),
對其進(jìn)行定位、定性及定量的研究,稱為~。
(一)免疫細(xì)胞化學(xué)對抗原和抗體的要求
1)具有特異性高和親和力強(qiáng)的抗體是實(shí)驗(yàn)成功的首要條件。
對抗體的要求: 純度高、比活性強(qiáng);
2) 高度特異性抗體的獲得,取決于抗原的純度。
對抗原的要求:純度高,免疫原性強(qiáng),穩(wěn)定無變化。
(二)免疫細(xì)胞化學(xué)抗原(antigen, Ag)
1)抗原的概念:凡是在機(jī)體內(nèi)引起體液兔疫和(或)細(xì)胞免疫反應(yīng)的物質(zhì),稱為抗原??乖哂袃蓚€方面的
特性:
①免疫原性:引起機(jī)體產(chǎn)生抗體和(或)致敏淋細(xì)胞的特性;
②免疫反應(yīng)性:抗原能與相應(yīng)的抗體及致敏淋巴細(xì)胞發(fā)生特異的結(jié)合或反應(yīng)的特性。
2)根據(jù)抗原是否顯示免疫原性分為:
①*抗原:分子量較大,-般在10kDa以上,并具有較復(fù)雜的化學(xué)組成。免疫原性*-強(qiáng)的是蛋白質(zhì)抗原,多糖次之;脂類和核酸必需和蛋白質(zhì)及多糖形成復(fù)合物才具有良好的免疫原性。
②半抗原:又稱為不*抗原,分子量較小。例如:某些短肽、多糖、類脂和藥物等。半抗原必需與載體結(jié)合,才能獲得免疫原性。
免疫細(xì)胞化學(xué)載體
通常是具有高度免疫原性的大分子物質(zhì),具有將免疫原性傳遞給耦聯(lián)的半抗原能力。
①常用的載體有鑰孔血藍(lán)蛋白(keyhole limpet hemocyanin, KLH)、 牛血清白蛋白(bovine serumalbumin, BSA).卵白蛋白(Ovalbumin, OVA)等。
②戊二醛或碳化二亞胺作為交聯(lián)劑通過功能基團(tuán)-NH2、-COOH等將半抗原結(jié)合到載體上。結(jié)合比例為5kDa結(jié)合5 ~ 25個分子的小肽。
(三)抗體(antibody, Ab)
1.抗體的概念:
①機(jī)體受到抗原刺激后,由漿細(xì)胞合成并分泌出一類具有與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的球蛋白,被稱為抗體。
②抗體主要存在于血清內(nèi);
③抗體都是免疫球蛋白,但免疫球蛋白并不-定都是抗體。
④免疫球蛋白根據(jù)重鏈的結(jié)構(gòu)及抗原特異性不同分為五種,既lgG、lgD、 lgE、 lgA. IgM.
2、兔疫組化實(shí)驗(yàn)中常用的抗體:單克隆抗體和多克隆抗體。
①單克隆抗體:是一個B淋巴細(xì)胞克隆分泌的抗體,是應(yīng)用細(xì)胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動物制備的。特異性強(qiáng)、抗體產(chǎn)量高。
②多克隆抗體:是將純化后的抗原直接免疫動物后,從動物血中所獲得的免疫血清,是多個B淋巴細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。
-特異性低,會產(chǎn)生抗體的交叉反應(yīng)。
-多克隆抗體廣泛應(yīng)用于石蠟包埋組織切片,可減少假陰性染色機(jī)會。
-抗原與抗體的結(jié)合,要求量保持一定比例, 當(dāng)抗原或抗體過量時,是不能聚合成大顆粒。
3、抗體的制備一多克隆抗體的制備
①動物的選擇
②佐劑(adjuvant)
③免疫方法
④免疫劑量
⑤抗體效價的測定
⑥放血或定期抽血
選擇什么動物來免疫取決于:
(1)動物的選擇
①所需抗血清的量
小鼠只能提供1.0 ~ 1.5ml的血液,而山羊能提供幾升。
②能供免疫用的抗原量小鼠50mg足夠,而山羊需要幾毫克。
③動物的品系:免疫動物與提供抗原的動物之間的種系差異越大越好。
例如哺乳動物的抗原可選擇非哺乳動物來制備抗體。
常用的動物有兔、羊、馬、豬等,以兔(新西蘭兔,年輕,健壯,體重在2 .5kg左右,雄性)為*-常用。
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