會(huì)員.png)
14
*也被稱為 Anti-reverse Cap Analog （ARCA） ，即抗-反向帽類似物。
概述
體外實(shí)驗(yàn)的初始階段，絕大多數(shù)真核生物 mRNA 5' 端 m7G 帽結(jié)構(gòu)可促進(jìn)翻譯。對(duì)于絕大多數(shù) RNA，帽結(jié)構(gòu)都可提高 RNA 的穩(wěn)定性，降低其對(duì)核酸外切酶降解的敏感性，并促進(jìn) mRNA 起始復(fù)合體的形成。一些具有 5' 端帽結(jié)構(gòu)的原核 mRNA 也可以像真核 mRNA 一樣，能在真核生物無細(xì)胞蛋白合成體系中獲得高效翻譯。另外，還發(fā)現(xiàn)在真核生物靶 RNA 的剪切過程同樣需要帽結(jié)構(gòu)。
用 7 甲基 G 帽結(jié)構(gòu)類似物，m7G（5' ）ppp（5' ）G （NEB#S1404） 作為引物能在 SP6 RNA 聚合酶、T7 RNA 聚合酶和 T3 RNA 聚合酶作用下，轉(zhuǎn)錄出更多的帶帽RNA。因?yàn)檗D(zhuǎn)錄時(shí)，T7 RNA 聚合酶摻入的*個(gè)堿基是 G，所以用 #S1405 或 #S1406 轉(zhuǎn)錄出帶有 A-帽結(jié)構(gòu)的 RNA，就不能夠翻譯，但這對(duì)于轉(zhuǎn)染和顯微注射實(shí)驗(yàn)有很好的穩(wěn)定性。Contrease 等已經(jīng)建立了一套方法，以 m7G（5' ）ppp（5' ）G （NEB #S1404）或 m7G（5' ）ppp（5' ）A （NEB #S1405） 為引物，利用 E. coli RNA 聚合酶，在體外有效合成帶帽 RNA。
帽類似物有兩個(gè)3' 羥基基團(tuán)使得它們可從任一方向結(jié)合到 RNA 上。而抗-反向帽類似物（ARCA）3' OMethyl-m7G（5' ）ppp（5' ）G （NEB #S1411） 的一個(gè)羥基被甲基化，只能以 m7G 作為*個(gè)堿基與 RNA 結(jié)合，而這個(gè)方向可以增強(qiáng)體外翻譯。
N-7003
ARCA （Anti Reverse Cap Analog）
key step in cellular mRNA processing is the addition of a 5’ cap structure, which is a 5'-5' triphosphate linkage between the 5' end of the RNA and a guanosine nucleotide. The cap is methylated enzymatically at the N-7 position of the guanosine to form mature mCAP.
| Anderson, B.R., Muramatsu, H., Jha, B.K., Silverman, R.H., Weissman, D., Kariko, K. Nucleoside modifications in RNA limit activation of 2'-5'-oligoadenylate synthetase and increase resistance to cleavage by RNase L （2011） Nucleic Acids Research, EPub Aug | ||||
| Warren et al., Highly Efficient Reprogramming to Pluripotency and Directed Differentiation of Human Cells with Synthetic Modified mRNA, Cell Stem Cell （2010）, doi:10.1016/j.stem.2010.08.012. | ||||
| Anderson, B., Muramatsu, H., Nallagatla, S.R., Bevilacqua, P.C., Sansing, L.H., Weissman, D. & Kariko, K. Incorporation of pseudouridine into mRNA enhances translation by dimishing PKR activation （2010） Nucleic Acids Research, 38（17）: 5884-5892. | ||||
| Kariko, K., Buckstein, M., Ni, H. & Weissman, D. Suppression of RNA Recognition by Toll-like Receptors: The Impact of Nucleoside Modifiation and the Evolutionary Origin of RNA （2005）. Immunity, 23（2）, 165-175. | ||||
| Peng ZH, Sharma V, Singleton SF, Gershon PD. Synthesis and application of a chain-terminating dinucleotide mRNA cap analog. （2002） Organic Letters. 4（2）:161-4. | ||||
| Konarska MM, Padgett RA, Sharp PA. Recognition of cap structure in splicing in vitro of mRNA precursors. （1984） Cell. 38（3）:731-6. | ||||
| Miura K. The cap structure in eukaryotic messenger RNA as a mark of a strand carrying protein information. （1981） Adv Biophys. 14:205-38. | ||||
| Banerjee AK. 5'-terminal cap structure in eucaryotic messenger ribonucleic acids. （1980） Microbiol Rev. 44（2）:175-205. | ||||
| Rosenberg M, Paterson BM. Efficient cap-dependent translation of polycistronic prokaryotic mRNAs is restricted to the first gene in the operon. （1979） Nature. 21;279（5715）:696-701. | ||||
| Filipowicz W. Functions of the 5,-terminal m7G cap in eukaryotic mRNA. （1978） FEBS Lett. 96（1）:1-11. | ||||
| Zan-Kowalczewska M, Bretner M, Sierakowska H, Szczesna E, Filipowicz W, Shatkin AJ. Removal of 5'-terminal m7G from eukaryotic mRNAs by potato nucleotide pyrophosphatase and its effect on translation. （1977） Nucleic Acids Res. 4（9）:3065-81. | ||||
| N-7003-1 | ARCA | 1umole |
| N-7003-10 | ARCA | 10umoles |
| N-7003-5 | ARCA | 5umoles |
