實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)即是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR避免了傳統(tǒng)PCR以終產(chǎn)物檢測定量產(chǎn)生的偏差，提高實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性。該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的 mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。
SYBR Green熒光染料法
SYBR Green是一種DNA結(jié)合染料，能非特異地?fù)饺氲诫p鏈DNA中去。在游離狀態(tài)下，它不發(fā)出熒光，但一旦結(jié)合到雙鏈DNA中以后，便可以發(fā)出熒光。它的*大優(yōu)點(diǎn)就是可以與任意引物、模板相配合，用于任意反應(yīng)體系中。從經(jīng)濟(jì)角度考慮，它也比其它的探針的價(jià)格要便宜得多。但由于它能與所有的雙鏈DNA結(jié)合，所以一旦反應(yīng)體系中出現(xiàn)非特異擴(kuò)增，那它就會影響到定量結(jié)果的可靠性與重復(fù)性。要避免這種不利因素，可以通過選擇良好的引物并優(yōu)化反應(yīng)條件以消除非特異性影響。
TaqMan熒光探針法
PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5-3外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RealTime PCR)技術(shù)服務(wù)
PCR實(shí)驗(yàn)
服務(wù)項(xiàng)目 | 終端報(bào)價(jià) | 說明 | 實(shí)驗(yàn)周期 |
SYBR Green染料法（單孔） | 80元/例/基因 |
包含引物設(shè)計(jì)合成、提取、逆轉(zhuǎn)錄、擴(kuò)增.內(nèi)參免費(fèi)（多樣本多基因可優(yōu)惠6-8折）
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1至2周內(nèi) |
SYBR Green染料法（兩重復(fù)） | 100元/例/基因 | ||
SYBR Green染料法（三重復(fù)） | 120元/例/基因 | ||
DNA提取 | 30元/樣本 |
包含濃度測定 |
1周內(nèi) |
RNA提取 | 35元/樣本 | ||
miRNA定量檢測（單孔） | 90元/例/基因 |
包含引物設(shè)計(jì)合成、提取、逆轉(zhuǎn)錄、擴(kuò)增.內(nèi)參免費(fèi) |
1至2周內(nèi) |
lcnRNA定量檢測（單孔） | 90元/例/基因 | ||
siRNA合成 | 1000元/條 | 包含siRN及NC各一條 | 2至3周內(nèi) |
Taqman探針 | 1200元/條 | 包含探針一條及上下游引物一對 | 1至2周內(nèi) |
SNP檢測 | 100元/例/位點(diǎn) | 包含DNA提取、擴(kuò)增、測序 | 2至3周內(nèi)
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靶基因PCR擴(kuò)增動力曲線 PCR熔解曲線
實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)：
實(shí)驗(yàn)室代做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目
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| 染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實(shí)驗(yàn)服務(wù)
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化工儀器網(wǎng)