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NGS，即下一代測(cè)序技術(shù)，是近年來(lái)基因測(cè)序領(lǐng)域的一次重大突破。相較于傳統(tǒng)的測(cè)序方法，NGS具有高通量、高準(zhǔn)確性、低成本等諸多優(yōu)勢(shì)，使得基因測(cè)序變得更加高效和便捷。通過(guò)NGS技術(shù)，科學(xué)家們能夠更深入地了解基因組的結(jié)構(gòu)和功能，為疾病診斷、治療以及新藥研發(fā)等領(lǐng)域提供了強(qiáng)有力的支持。
酶切法建庫(kù)：NGS的得力助手
在NGS的研究中，建庫(kù)是一個(gè)至關(guān)重要的環(huán)節(jié)。建庫(kù)的質(zhì)量直接影響到測(cè)序結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。而酶切法建庫(kù)，避免了傳統(tǒng)的機(jī)械打斷，無(wú)需打斷儀，流程簡(jiǎn)便，可同時(shí)處理多個(gè)樣，更適合于自動(dòng)化建庫(kù)，滿足大規(guī)?；蚪M研究的需求，是目前應(yīng)用廣泛的建庫(kù)方法之一。
酶切法建庫(kù)有其優(yōu)勢(shì)，但是也有其劣勢(shì)，比如：酶切偏好性、引入假陽(yáng)性、起始量適用范圍窄等，翌圣借助ZymeEditor（點(diǎn)擊了解更多）酶改造及發(fā)酵純化工藝平臺(tái)，對(duì)酶進(jìn)行進(jìn)化改造，及不斷優(yōu)化的反應(yīng)體系，克服了酶切法建庫(kù)方法學(xué)上的局限性，讓酶切法建庫(kù)更精準(zhǔn)更快速！
Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V3（Cat#12194）
Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V3 是一款可用于Illumina®和MGI®高通量測(cè)序平臺(tái)的新一代酶切法建庫(kù)試劑盒。本試劑盒將片段化模塊與末端修復(fù)模塊合二為一，極大的降低了建庫(kù)的時(shí)間和成本、連接模塊的酶和buffer預(yù)混，簡(jiǎn)化了操作流程，更加適合于自動(dòng)化建庫(kù)。
實(shí)驗(yàn)原理
圖1.酶切法建庫(kù)原理
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
高效穩(wěn)定的片段化效果
以不同質(zhì)量等級(jí)的FFPE DNA樣本建庫(kù)，樣本投入量100 ng，采用同一酶切條件4℃ 1 min，37℃10 min，72℃ 20 min，4℃ hold，文庫(kù)主峰在300 bp左右；數(shù)據(jù)顯示不同降解程度的FFPE樣本同一酶切條件下，文庫(kù)主峰基本一致。
FFPE DNA質(zhì)量等級(jí) | A | B | C | D |
文庫(kù)產(chǎn)量（ng） | 2550 | 2470 | 1760 | 1790 |
文庫(kù)主峰（bp） | 295bp | 301bp | 288bp | 278bp |
圖2.FFPE DNA的酶切文庫(kù)峰圖
高效穩(wěn)定的片段化效果
Human gDNA為模板，以不同的樣本投入量，12194與競(jìng)品W試劑盒相比，12194的文庫(kù)產(chǎn)量與競(jìng)品相當(dāng)。數(shù)據(jù)顯示不同投入量文庫(kù)產(chǎn)量對(duì)比，12194有高效的文庫(kù)轉(zhuǎn)化效率。
極低的假陽(yáng)性率
NGS建庫(kù)引入的假陽(yáng)性問(wèn)題主要包括嵌合序列和堿基錯(cuò)摻等因素，在酶切法片段化時(shí)將會(huì)引入一些假的嵌合序列，12194對(duì)片段化酶全面升級(jí)，解決了酶切假陽(yáng)性的痛點(diǎn)。
用12194酶法片段化建庫(kù)試劑盒對(duì)3種標(biāo)準(zhǔn)品樣本（FFPE標(biāo)準(zhǔn)品、gDNA標(biāo)準(zhǔn)品、ctDNA標(biāo)準(zhǔn)品）建庫(kù)，并和競(jìng)品W進(jìn)行了頭對(duì)頭的比較。數(shù)據(jù)顯示，無(wú)論是FFPE樣本、gDNA、還是ctDNA，12194的Soft Clip、false chimeric都低于或近似于競(jìng)品W。
圖4.12194與競(jìng)品W的數(shù)據(jù)質(zhì)量對(duì)比
優(yōu)異的位點(diǎn)檢出率
用12194和競(jìng)品W建庫(kù)雜交捕獲測(cè)序?qū)Ρ?，模板類型為腫瘤SNV 5% gDNA標(biāo)準(zhǔn)品GW-OGTM006和腫瘤gDNA野生型標(biāo)準(zhǔn)品GW-OGTM005，將突變位點(diǎn)稀釋為 0.5% 和0.1%，模板投入量100ng，PCR擴(kuò)增循環(huán)數(shù)為7，捕獲panel為何因Cancer SLC Panel，平均測(cè)序深度為5000×，比較捕獲測(cè)序數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)顯示12194對(duì)突變位點(diǎn)檢出率與目標(biāo)檢出率一致。
圖5.12194與競(jìng)品W的低頻位點(diǎn)檢出率
產(chǎn)品訂購(gòu)指南
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號(hào) | 產(chǎn)品規(guī)格 |
Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V3一步法DNA建庫(kù)試劑盒V3 | 12194ES08 | 8 T |
12194ES24 | 24 T | |
12194ES96 | 96 T |
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產(chǎn)品應(yīng)用 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) |
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