氯仿是Trizol試劑提取提取RNA的必需品。由于氯仿為化學(xué)品，在訂購(gòu)、使用和儲(chǔ)存等方面有很多的法律法規(guī)要求和限制。2019年7月23日，氯仿被納入生態(tài)環(huán)境部國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)發(fā)布的《有毒有害水污染物名錄(第一批)》；2023年3月1日，氯仿又被納入《重點(diǎn)管控新污染物清單(2023年版)》。氯仿有很強(qiáng)的麻醉作用，主要作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，造成肝，腎損害，已被流行病學(xué)證實(shí)為動(dòng)物致癌物質(zhì)，危害很大。氯仿即屬于有毒試劑，又屬于管制試劑，采購(gòu)受到限制。怎么辦呢？

翌圣生物推出RNA Extraction buffer RNA提取輔助試劑19203ES，該試劑安全、低毒，主要用于在Trizol、TRIeasyTM（10606ES）等RNA抽提過(guò)程中替代氯仿，快來(lái)一起了解下吧！

Trizol法提取總RNA

基本原理

Trizol試劑可以直接從組織或細(xì)胞中提取總RNA，該試劑的成分為異硫氰酸胍、酚、8-羥基喹啉和β-巰基乙醇。在樣品裂解或勻漿的過(guò)程中，trizol試劑能迅速破碎細(xì)胞，抑制細(xì)胞釋放出來(lái)的核酸酶且保持RNA的完整性。加入氯仿離心后，樣品分為水相層和有機(jī)相層，RNA存在于水相層中，在酸性條件下總RNA保留在上層水相中。而大部分DNA和蛋白質(zhì)保留在中間相或下層有機(jī)相中。收集上述水樣層后，可通過(guò)異丙醇沉淀來(lái)回收RNA。此外，樣品中的DNA和蛋白也能以沉淀的方式還原。乙醇沉淀能析出中間層的DNA，而在有機(jī)層中加入異丙醇能沉淀出蛋白。

主要試劑和耗材

Trizol 氯仿異丙醇乙醇離心管 RNase-Free水槍頭

實(shí)驗(yàn)流程圖

TRIzol 無(wú)氯仿解決方案

加1mL TRIeasyTM（Cat#10606ES）試劑，裂解樣本，室溫孵育5 min；

加0.2 mL RNA Extraction buffer（Cat#19203ES），振蕩混勻，孵育3 min；

在4°C下12000×g離心樣本15 min；

取約500 μL上清液至新樣本管中；

加等樣本體積的異丙醇，顛倒混勻，在4°C下孵育10 min；

在4°C下12000×g離心10 min，棄上清；

加1mL 75%乙醇，重懸沉淀，短暫渦旋樣本，在4°C下7500×g離心5 min，棄上清液。此步驟重復(fù)一次；

干燥5-10 min，加20-50 μL RNase-Free水，在55°C的水浴孵育10min。

19203ES

RNA Extraction buffer RNA提取輔助試劑

產(chǎn)品亮點(diǎn)

毒性低：本產(chǎn)品與氯仿的功能非常相似，但不含氯仿，相對(duì)毒性低，是氯仿的替代品；
分離效果好：本產(chǎn)品替代氯仿提取RNA，具有與氯仿媲美的分離效果；
使用方便、性價(jià)比高：每個(gè)樣本添加200 μL，使用量與氯仿一致。

產(chǎn)品性能

采用TRIeasy™ Total RNA Extraction Reagent 10606ES提取10 mg魚(yú)肝樣本，實(shí)驗(yàn)組加入0.2 mL RNA Extraction buffer（Cat#19203ES），對(duì)照組加入0.2 mL氯仿，提取的RNA采用Nanodrop檢測(cè)RNA的濃度和純度，取5 μL進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。結(jié)果如圖所示，翌圣無(wú)氯仿提取后的RNA，含量高，純度好，完整性指數(shù)高。

圖1.提取的RNA濃度、純度和瓊脂糖凝膠電泳圖

訂購(gòu)信息

產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品貨號(hào)	產(chǎn)品規(guī)格
RNA Extraction bufferRNA提取輔助試劑（替代氯仿）	19203ES60	100 mL

相關(guān)產(chǎn)品

產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品貨號(hào)	產(chǎn)品應(yīng)用
TRIeasy™ Total RNA Extraction Reagent	10606ES60	總RNA提取
MolPure® TRIeasy Plus Total RNA Kit	19211ES	總RNA提取
TRIeasyTM LS Total RNA Extraction Reagent 液體總RNA提取試劑（同TRIzol LS）	19201ES60	總RNA提取
MolPure® Cell/Tissue Total RNA Kit	19221ES	細(xì)胞/組織總RNA提取
MolPure® Cell/Tissue miRNA Kit 細(xì)胞/組織miRNA提取試劑盒	19331ES08	miRNA提取試劑盒
MolPure® Plant Plus RNA Kit 多糖多酚植物RNA提取試劑盒	19292ES08	miRNA提取試劑盒